巴曲酶對實驗性腦出血大鼠的神經保護作用及其機制研究.pdf

1、研究目的：腦出血（ICH）是一種高發(fā)病率和高死亡率的腦血管疾病類型。腦出血后，由于血腫面積不斷擴大，導致并加重了周圍腦組織水腫，在很大程度上造成了神經功能的損傷，因而腦出血患者常伴有神經功能障礙，且多數存活者留有永久性神經功能缺失。減輕出血后繼發(fā)性腦損傷則成為臨床上治療腦出血的重點，目前應用較為廣泛的治療方法是使用脫水劑常規(guī)控制腦水腫、降低顱內壓；纖溶酶原激活劑如重組鏈激酶（r-SK）、組織纖溶酶原激活劑（t-PA）溶解凝血塊；以及必要

2、時進行手術清除血腫等。但出血后腦水腫產生的機制非常復雜，且纖溶酶原激活劑在溶解血塊同時，又加強了凝血酶介導的腦損傷。因此，尚需尋求更為安全有效的治療藥物。 巴曲酶是一種從蝮蛇毒素中提取的單組分的蛇毒降纖酶制劑，該藥自上市以來，在國內外急性腦梗塞的臨床溶栓治療中已得到廣泛應用。它不僅能夠通過分解纖維蛋白原、誘導內皮細胞釋放t-PA、激活纖溶酶原，有效抑制血栓形成并溶解血栓；還能夠減輕卒中后腦水腫和腦組織損傷，具有神經保護作用。

3、 本課題觀察了巴曲酶對實驗性腦出血大鼠的干預作用，研究其對腦出血后血腫及周圍腦水腫所致的腦損傷是否具有保護作用，并探討其可能的神經保護作用機制。 研究方法：將大鼠分為假手術組，模型組，巴曲酶小、中、大劑量組及尼莫地平陽性對照組。在腦立體定向儀上，根據大鼠腦立體定位圖譜定位腦部尾狀核后，用微量注射器向尾狀核注射Ⅶ型膠原酶建立大鼠腦出血模型。假手術組僅于尾狀核注射生理鹽水，不做出血處理。各用藥組于尾狀核注射膠原酶同時腹腔注射給藥

4、。術后4小時及24小時進行神經行為學評分；末次評分后斷頭取腦，干濕重法，測定腦組織含水量；腦組織切片HE染色，電鏡下觀察腦組織病理形態(tài)學改變，以觀察巴曲酶對腦出血大鼠是否具有神經保護作用。同時，用試劑盒測定腦組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量變化；采用懸浮細胞的熒光分光光度計法測神經細胞內游離鈣離子濃度（[Ca2+]i）的變化；以及用SABC（鏈霉親和素生物素酶復合物）免疫組化法檢測腦組織中血紅素加氧酶-2（HO-

5、2）和神經膠質元纖維酸性蛋白（GFAP）的表達來探討其可能的作用機制。 研究結果：（1）巴曲酶（8、16 BU/kg）及尼莫地平可顯著改善大鼠腦出血4h及24h的神經肌肉運動功能，降低出血后腦含水量，改善腦組織的病理形態(tài)學改變。與模型組比較，巴曲酶8 BU/kg和16BU/kg腦含水量從49.5±1.0分別下降到47.4±1.2和46.8±1.4，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；（2）巴曲酶（8、16 BU/kg）能夠明顯升

6、高腦出血大鼠腦組織內SOD活性，減少MDA含量和[Ca2+]i，并能抑制腦組織中HO-2和GFAP的過度表達。與模型組比較，巴曲酶8BU/kg和16 BU/kg SOD活力從57.4±29.5分別升高到116.8±19.6和126.2±31.4、MDA含量從1.4±0.39分別下降到1.0±0.3和0.83±0.2、[Ca2+]i從257.4±35.3分別下降到182.7±21.2和152.3±12.1，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05

7、）；（3）巴曲酶（4BU/kg）對大鼠出血后4h的神經肌肉運動功能、腦組織含水量和病理形態(tài)學沒有明顯改善，僅對出血后24h的神經肌肉運動功能有一定作用；巴曲酶（4BU/kg）也沒有明顯升高腦內SOD活性、減少MDA含量和抑制腦組織中HO-2和GFAP的表達，但對[Ca2+]i的抑制作用比較明顯，其[Ca2+]i為196.0±15.1，與模型組257.4±35.3比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 研究結論：（1）巴曲酶（

8、8、16 BU/kg）對大鼠腦出血后神經損傷有明顯保護作用；（2）巴曲酶（8、16 BU/kg）的作用機理可能與減輕大鼠腦出血后腦水腫程度、抗氧化損傷、抑制鈣超載、及降低紅細胞降解產物毒性和調節(jié)星形膠質細胞過度增生有關；（3）巴曲酶（4BU/kg）對大鼠腦出血沒有表現(xiàn)出明顯的神經保護作用；但對大鼠出血后24小時的神經行為學癥狀改善比較明顯，這除與腦卒中的運動功能障礙隨時間有一定的減輕有關外，此劑量組對[Ca2+]i的抑制作用也是其可能的