早期使用尖吻蝮蛇血凝酶防止實驗性腦出血血腫擴大及其神經(jīng)保護機制的研究.pdf

1、目的：通過立體定向方法向SD大鼠基底節(jié)區(qū)注射膠原酶，誘導(dǎo)大鼠實驗性腦出血(Intracerebral Hemorrhage，ICH)模型，予以不同劑量新型止血藥尖吻蝮蛇血凝酶（Hemocoagulase Agkistrodon，HCA）靜脈治療，觀察治療后不同時間點的血腫量、神經(jīng)功能損傷、血腦屏障通透性等變化情況，明確早期注射不同劑量尖吻蝮蛇血凝酶的止血治療效果，及其是否具有減少大鼠腦出血后血腫擴大、改善神經(jīng)癥狀及預(yù)后的作用，并初步探討

2、其神經(jīng)功能保護機制，為臨床HCA治療腦出血后早期血腫擴大、神經(jīng)保護功能提供轉(zhuǎn)化依據(jù)。
　　方法：1.實驗分組:將192只雄性SD大鼠(300g-350g)隨機分為Sham組(n=42)、ICH組(n=22)、ICH+Vehicle組(n=42)、腦出血+低劑量(ICH+HCA0.1mg/Kg)(n=22)組、腦出血+中劑量(ICH+HCA0.2mg/Kg)(n=22)和腦出血+高劑量(ICH+HCA0.4mg/Kg)(n=42)組

3、；2.模型制作及藥物處理：實驗性大鼠腦出血模型是右側(cè)基底節(jié)區(qū)注射0.5UⅦ型膠原酶誘導(dǎo)(坐標(biāo)：前囟前0.2mm，旁3.5mm和腹側(cè)深5.5mm)，藥物處理組是術(shù)后1h經(jīng)尾靜脈注射給藥一次；3.神經(jīng)功能缺失評分：ICH24h、72h后采用mNSS評分及轉(zhuǎn)角試驗進行評價，分值越高代表神經(jīng)功能損害越重，反之，則損傷越輕；4.凝血及生化功能檢測：ICH24h后采取下腔靜脈血分析各組凝血及生化功能是否有差異；5.血腫量檢測：ICH24h后采用血紅

4、蛋白分光光度法及MRI檢測出血腫量；6.血腦屏障檢測：造模24h后用伊文思藍(lán)法檢測血腦屏障通透性，制作并觀察腦組織大體切片；7.腦水含量檢測：腦出血后72h用干濕重法檢測腦水含量；8.血腫周圍神經(jīng)凋亡檢測：腦出血后72h用TUNEL法檢測血腫周圍神經(jīng)凋亡；9.炎癥因子及血腫周圍纖維蛋白原ELISA檢測：ICH24h用炎癥因子ELISA試劑盒檢測血腫周圍炎癥因子變化情況；10.免疫印跡檢測：腦出血后24h用免疫印跡法檢測血腫周圍MMP-9

5、、Claudin-5、ZO-1含量；11.組織免疫熒光染色：腦出血后24h用免疫熒光染色檢測小膠質(zhì)細(xì)胞；12統(tǒng)計分析：采用SSPS17.0軟件，結(jié)果均以Mean士SD表示，采用單因素方差分析，比較組間統(tǒng)計學(xué)差異，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果：1.ICH24h后各組凝血及生化功能檢測無統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；2.神經(jīng)功能缺失：ICH24h、72h后，與Sham組比較，ICH組及CH+Vehicle組神經(jīng)功能顯著缺失（P

6、<0.001）；高劑量治療組可顯著改善試驗性腦出血大鼠神經(jīng)功能缺損，3.，HCA止血效果確切，在出血ICH24h后，能夠減少腦出血血腫擴大，具有量效關(guān)系，中、高劑量治療組結(jié)果具有統(tǒng)計差異（P<0.05）；4.中、高劑量治療組可降低血腦屏障通透性，減少伊文思藍(lán)在術(shù)后24h后的腦內(nèi)沉積，具有統(tǒng)計差異（P<0.05）；7.中、高劑量治療組可降低術(shù)后72h后的腦水含量，減輕腦水腫，具有統(tǒng)計差異（P<0.05）；8.造模72h后，HCA可顯著減少

7、血腫周圍神經(jīng)凋亡（P<0.05）；9.造模24h后，血腫周圍纖維蛋白原沉積增加，HCA顯著降解其含量，并降低血腫周圍炎癥因子水平（P<0.05）；10.造模后24h，腦出血血腫周圍小膠質(zhì)細(xì)胞活化增殖，MMP-9含量顯著上升，而治療組血腫周圍MMP-9含量及小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量顯著減少（P<0.05）；11.造模后24h，腦出血血腫周圍Claudin-5、ZO-1含量減少，而治療組血腫周圍Claudin-5、ZO-1含量增加（P<0.05）。<