異丙酚對大鼠腦出血保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：腦出血(intracerebral hemorrhage，ICH)是神經內科常見病，且致殘率很高。ICH后血腫周圍組織繼發(fā)性腦損害的機理比較復雜，尚未完全明了，目前缺乏特效治療措施，預后差，因此積極尋找有效的方法治療ICH具有重大的意義。本研究觀察異丙酚對膠原酶所誘導的大鼠ICH模型的保護作用并作初步的機制探討，為其臨床應用提供理論依據(jù)。 方法：雄性SD大鼠，體重250～300g，隨機分為正常組、假手術組、腦出血模型組和異

2、丙酚治療組，后三組各組內再隨機分為術后6h、12h、24h、48h、96h五個時間點。采用Rosenberg的方法在立體定向儀下，將Ⅶ型膠原酶0.4U注入大鼠右側蒼白球誘導ICH模型。假手術組只插針，不注射藥物。治療組在ICH造模成功入選后4h給予異丙酚100mg/kg，腹腔注射，每天一次，模型組和假手術組均給予等量生理鹽水腹腔注射，每日一次。按照Bederson等<'[2]>的神經缺損分級評分標準觀察大鼠的行為學評分，直至上述相應時間

3、點處死。實驗一，用灌流法取腦進行超薄切片，制作常規(guī)病理切片，分別行HE染色，用光鏡觀察出血灶及腦水腫情況；用TUNEL法原位檢測神經細胞凋亡的變化；用免疫組化方法觀察細胞間粘附分子-1(ICAM-1)表達的變化。實驗二，直接斷頭處死取血腫周圍腦組織，采用Western blot方法分析大鼠腦出血側及出血對側核轉錄因子-кB(NF-кB)表達的改變；24h和48h組取3只大鼠血腫周圍腦組織經鈾鉛雙重染色，在透射電子顯微鏡下觀察神經元超微結

4、構。 結果： 1.大鼠神經行為學評分：正常組、假手術組大鼠均無明顯神經功能缺損，評分為0分，ICH模型組與異丙酚治療組入選大鼠神經行為學評分均為3分，提示行為學異常與腦損害程度一致。隨著時間的推移兩組大鼠神經行為學評分出現(xiàn)不同程度的改善，治療組大鼠評分改善快于ICH模型組， 96h時兩組間差異有顯著性(P<0.05)。 2.病理改變：(1)HE染色：模型組ICH后大鼠腦組織出現(xiàn)明顯的病理改變，第6h、12h的切

5、片可見到明顯的出血灶，病灶周圍組織輕度疏松水腫，伴有少許炎癥細胞浸潤；第24h、48h、96h的切片可見到病灶周圍細胞間隙增大明顯，炎癥細胞浸潤更為嚴重。治療組能夠稍減輕ICH岳組織水腫和炎癥細胞浸潤。(2)超微結構改變： ICH后24h，星形細胞腫脹明顯，胞漿呈空泡樣改變，部分細胞變性、壞死；神經元輕度變性，胞核固縮，核膜下染色質輕度凝聚，電子密度增高；髓鞘板層局部斷裂、崩解；毛細血管肉皮細胞腫脹，血腦屏障破壞。ICH后48h，星形

6、細胞高度腫脹，胞漿內可見大片水腫液，胞核染色質消失，部分細胞胞膜崩解，胞漿內細胞器散落于細胞外；神經元變性，胞漿呈空泡狀，核膜凹陷，核內染色質凝聚，線粒體腫脹，嵴斷裂，胞膜不完整；髓鞘板層斷裂、崩解，空軸現(xiàn)象多見；毛細血管內皮細胞腫脹，管腔變窄。正常組、假手術組電鏡下神經元結構正常。治療組超微結構改變比ICH模型組明顯減輕。 3.神經細胞凋亡：正常對照組及假手術組大鼠腦內偶見TUNEL陽性細胞，ICH模型組術后6h血腫周圍可見T

7、UNEL陽性細胞表達，24h后陽性細胞表達明顯增多，48h達高峰，96h有所下降，與正常組、假手術組比較各時間點差異均有顯著性(P<0.01)。異丙酚治療組相應各時間點的TUNEL陽性表達明顯減少，尤以48h、96h較為明顯，與ICH模型組比較差異有顯著性(P<0.05)。 4.細胞間粘附分子-1(ICAM-1)表達：正常組未見ICAM-1陽性細胞；假手術組僅在針道附近見到少量ICAM-1陽性細胞；ICH型組6 h大鼠血腫周圍看

8、到少量ICAM-1陽性細胞、24h ICAM-1陽性細胞逐漸增多，于48 h達峰值，96h逐漸下降但仍高于假手術組(P<0.01)。治療組除6h外，其余各時間點ICAM-1陽性細胞數(shù)均較模型組低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 5.NF-кBp65表達：與正常組比較，假手術組和模型組出血對側的NF-кB表達無明顯增高；模型組出血側6hNF-кB表達較正常組開始增高(P>0.05)，12h表達明顯增高(P<0.05)，至24g

9、表達達高峰(P<0.01)，48h略有下降，但差異仍有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，至96h仍有表達(P<0.05)。與模型組比較，治療組出血側24、48h，NF-кB表達均明顯下降(P<0.05)。 結論：ICH最重要的病理改變是血腫引發(fā)的繼發(fā)性腦水腫及細胞凋亡。異丙酚可以有效減輕ICH后的細胞凋亡，并減輕細胞超微結構的改變，對膠原酶所引起的大鼠ICH具有保護作用。異丙酚可能通過抑制ICH后NF-кB和ICAM-1的表達、抑制炎