異丙酚對大鼠腦出血保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：腦出血(intracerebral hemorrhage，ICH)是神經(jīng)內(nèi)科常見病，且致殘率很高。ICH后血腫周圍組織繼發(fā)性腦損害的機(jī)理比較復(fù)雜，尚未完全明了，目前缺乏特效治療措施，預(yù)后差，因此積極尋找有效的方法治療ICH具有重大的意義。本研究觀察異丙酚對膠原酶所誘導(dǎo)的大鼠ICH模型的保護(hù)作用并作初步的機(jī)制探討，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：雄性SD大鼠，體重250～300g，隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、腦出血模型組和異

2、丙酚治療組，后三組各組內(nèi)再隨機(jī)分為術(shù)后6h、12h、24h、48h、96h五個(gè)時(shí)間點(diǎn)。采用Rosenberg的方法在立體定向儀下，將Ⅶ型膠原酶0.4U注入大鼠右側(cè)蒼白球誘導(dǎo)ICH模型。假手術(shù)組只插針，不注射藥物。治療組在ICH造模成功入選后4h給予異丙酚100mg/kg，腹腔注射，每天一次，模型組和假手術(shù)組均給予等量生理鹽水腹腔注射，每日一次。按照Bederson等<'[2]>的神經(jīng)缺損分級評分標(biāo)準(zhǔn)觀察大鼠的行為學(xué)評分，直至上述相應(yīng)時(shí)間

3、點(diǎn)處死。實(shí)驗(yàn)一，用灌流法取腦進(jìn)行超薄切片，制作常規(guī)病理切片，分別行HE染色，用光鏡觀察出血灶及腦水腫情況；用TUNEL法原位檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化；用免疫組化方法觀察細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)表達(dá)的變化。實(shí)驗(yàn)二，直接斷頭處死取血腫周圍腦組織，采用Western blot方法分析大鼠腦出血側(cè)及出血對側(cè)核轉(zhuǎn)錄因子-кB(NF-кB)表達(dá)的改變；24h和48h組取3只大鼠血腫周圍腦組織經(jīng)鈾鉛雙重染色，在透射電子顯微鏡下觀察神經(jīng)元超微結(jié)

4、構(gòu)。 結(jié)果： 1.大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分：正常組、假手術(shù)組大鼠均無明顯神經(jīng)功能缺損，評分為0分，ICH模型組與異丙酚治療組入選大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分均為3分，提示行為學(xué)異常與腦損害程度一致。隨著時(shí)間的推移兩組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分出現(xiàn)不同程度的改善，治療組大鼠評分改善快于ICH模型組， 96h時(shí)兩組間差異有顯著性(P<0.05)。 2.病理改變：(1)HE染色：模型組ICH后大鼠腦組織出現(xiàn)明顯的病理改變，第6h、12h的切

5、片可見到明顯的出血灶，病灶周圍組織輕度疏松水腫，伴有少許炎癥細(xì)胞浸潤；第24h、48h、96h的切片可見到病灶周圍細(xì)胞間隙增大明顯，炎癥細(xì)胞浸潤更為嚴(yán)重。治療組能夠稍減輕ICH岳組織水腫和炎癥細(xì)胞浸潤。(2)超微結(jié)構(gòu)改變： ICH后24h，星形細(xì)胞腫脹明顯，胞漿呈空泡樣改變，部分細(xì)胞變性、壞死；神經(jīng)元輕度變性，胞核固縮，核膜下染色質(zhì)輕度凝聚，電子密度增高；髓鞘板層局部斷裂、崩解；毛細(xì)血管肉皮細(xì)胞腫脹，血腦屏障破壞。ICH后48h，星形

6、細(xì)胞高度腫脹，胞漿內(nèi)可見大片水腫液，胞核染色質(zhì)消失，部分細(xì)胞胞膜崩解，胞漿內(nèi)細(xì)胞器散落于細(xì)胞外；神經(jīng)元變性，胞漿呈空泡狀，核膜凹陷，核內(nèi)染色質(zhì)凝聚，線粒體腫脹，嵴斷裂，胞膜不完整；髓鞘板層斷裂、崩解，空軸現(xiàn)象多見；毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，管腔變窄。正常組、假手術(shù)組電鏡下神經(jīng)元結(jié)構(gòu)正常。治療組超微結(jié)構(gòu)改變比ICH模型組明顯減輕。 3.神經(jīng)細(xì)胞凋亡：正常對照組及假手術(shù)組大鼠腦內(nèi)偶見TUNEL陽性細(xì)胞，ICH模型組術(shù)后6h血腫周圍可見T

7、UNEL陽性細(xì)胞表達(dá)，24h后陽性細(xì)胞表達(dá)明顯增多，48h達(dá)高峰，96h有所下降，與正常組、假手術(shù)組比較各時(shí)間點(diǎn)差異均有顯著性(P<0.01)。異丙酚治療組相應(yīng)各時(shí)間點(diǎn)的TUNEL陽性表達(dá)明顯減少，尤以48h、96h較為明顯，與ICH模型組比較差異有顯著性(P<0.05)。 4.細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)表達(dá)：正常組未見ICAM-1陽性細(xì)胞；假手術(shù)組僅在針道附近見到少量ICAM-1陽性細(xì)胞；ICH型組6 h大鼠血腫周圍看

8、到少量ICAM-1陽性細(xì)胞、24h ICAM-1陽性細(xì)胞逐漸增多，于48 h達(dá)峰值，96h逐漸下降但仍高于假手術(shù)組(P<0.01)。治療組除6h外，其余各時(shí)間點(diǎn)ICAM-1陽性細(xì)胞數(shù)均較模型組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 5.NF-кBp65表達(dá)：與正常組比較，假手術(shù)組和模型組出血對側(cè)的NF-кB表達(dá)無明顯增高；模型組出血側(cè)6hNF-кB表達(dá)較正常組開始增高(P>0.05)，12h表達(dá)明顯增高(P<0.05)，至24g

9、表達(dá)達(dá)高峰(P<0.01)，48h略有下降，但差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，至96h仍有表達(dá)(P<0.05)。與模型組比較，治療組出血側(cè)24、48h，NF-кB表達(dá)均明顯下降(P<0.05)。 結(jié)論：ICH最重要的病理改變是血腫引發(fā)的繼發(fā)性腦水腫及細(xì)胞凋亡。異丙酚可以有效減輕ICH后的細(xì)胞凋亡，并減輕細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變，對膠原酶所引起的大鼠ICH具有保護(hù)作用。異丙酚可能通過抑制ICH后NF-кB和ICAM-1的表達(dá)、抑制炎