自發(fā)性高血壓大鼠心肌重構信號轉導網(wǎng)絡的變化及多肽藥物匯利心康的調(diào)控作用.pdf

1、心肌重構是一種引起多種心血管疾病發(fā)病率和死亡率顯著升高的獨立危險因素，可引起心力衰竭和惡性心律失常，最終導致死亡。逆轉左心室肥大和重構已成為當前抗高血壓和治療慢性心力衰竭的重要目標之一。匯利心康(HLXK)是本實驗室針對在心肌重構過程中發(fā)揮關鍵作用的Gq蛋白α亞單位羧基末端，設計制備的一種多肽藥物，能通過抑制Gq蛋白信號傳導，有效抑制血管緊張素Ⅱ和去甲腎上腺素誘導的離體心肌細胞肥大反應，以及多種不同動物模型的心肌重構。
　　 然

2、而，心肌細胞的信號轉導系統(tǒng)是一個十分復雜的網(wǎng)絡，由眾多的神經(jīng)體液分子、受體、G蛋白、效應器、第二信使、轉錄因子等共同組成。其中多個信號分子之間都存在著反饋調(diào)節(jié)和交互作用，任何一個節(jié)點的變化都可能對整個網(wǎng)絡系統(tǒng)產(chǎn)生影響，從而精細調(diào)控整個細胞的信號轉導乃至組織器官功能。HLXK拮抗Gq功能后，不僅會影響Gq蛋白下游信號分子的表達和功能，而且可能對其他通路的信號分子產(chǎn)生影響。因此，研究HLXK對心肌細胞信號轉導網(wǎng)絡的影響不僅有助于進一步深入理

3、解其抗心肌重構作用機制，而且有助于了解其對心肌功能的整體影響。
　　 方法：
　　 1.動物分組：SHR雄性大鼠18只，隨機分為模型組、氯沙坦組和HLXK組(n=6)，分別給予生理鹽水(normal saline，NS)2ml/kg(ip，bid)、氯沙坦6mg/kg(ig，qd)和HLXK90μg/kg(ip，bid)，連續(xù)8W；并設立WKY大鼠正常對照，給予NS(2ml/kg，ip，bid)，連續(xù)8W。
　　

4、 2.實驗過程中，密切觀察大鼠的一般情況及其死亡情況。末次給藥后，稱量體重，頸椎脫臼處死，稱重法測定大鼠的心臟指數(shù)和左心室指數(shù)。
　　 3.采用定量PCR芯片技術檢測大鼠心肌組織中心肌重構相關通路的信號分子表達情況。
　　 4.結合PCR芯片篩選結果，采用Real-time PCR和Western blot進行驗證。
　　 結果：
　　 1.與WKY大鼠相比，SHR出現(xiàn)明顯心肌重構；HLXK能明顯降低SH

5、R大鼠的心臟指數(shù)和左心室指數(shù)，改善左心室重構；
　　 2.在SHR心肌重構信號傳導網(wǎng)絡中，信號轉導分子表達明顯上調(diào)的有Serpine1、Jun、Slpr3、Max、Grm1、Illr1、Cdkn1a、Crhr1、Chhr2、Ctgf、Edn1、Fgf2、Bcl211、AC5和Akt1；表達明顯下調(diào)的有Bai1、Ccnd1、Gcgr、Nos2(iNOS)、Pik3cg、Ptgdr、Sctr、Tnf和Vcam1。
　　 3.

6、RT-PCR芯片結果顯示HLXK能有效抑制Cdkn1a、Ctgf和Edn1基因表達，上調(diào)Grm4、Nos2和Tshr基因的表達。
　　 4.HKXK能明顯增加SHRα-MHC mRNA的表達，降低CaN mRNA、CDKN1AmRNA和β-MHC mRNA的表達；
　　 5.HKXK能明顯增加SHRα-MHC蛋白表達，降低CaN、CDKN1A和β-MHC蛋白表達。
　　 結論：
　　 1.自發(fā)性高血壓大鼠