慢性間歇性低氧對HDL代謝的影響及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分間歇低氧對大鼠血清HDL及肝臟PPARα、ABCA1表達(dá)的影響
　　目的:
　　本實(shí)驗(yàn)旨在動物水平上模擬體內(nèi)間歇低氧狀態(tài)，通過對雄性SD大鼠的慢性間歇性低氧及復(fù)氧干預(yù)，探討間歇性低氧對大鼠血脂的影響，在組織水平上，檢測肝臟HDL代謝相關(guān)代謝指標(biāo)PPARα、ABCA1的變化，觀察目的指標(biāo)在不同間歇缺氧濃度及對應(yīng)復(fù)氧組中表達(dá)的差異，進(jìn)而了解低氧與脂質(zhì)代謝的關(guān)系，初步探討復(fù)氧后上述指標(biāo)恢復(fù)情況及可能機(jī)制，尋找對間歇低氧刺激

2、敏感的靶指標(biāo)，為疾病的早期診斷、早期干預(yù)提供新的思路及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　建立間歇低氧大鼠模型并隨機(jī)分為6組，即對照3周組，對照6周組，10％間歇低氧3周(10％CIH-3)組，5％間歇低氧3周(5％CIH-3)組，10％復(fù)氧-6組即給予10％CIH處理3周后轉(zhuǎn)為常氧恢復(fù)3周，5％復(fù)氧-6組即給予5％CIH處理3周后轉(zhuǎn)為常氧恢復(fù)3周共6組，比較各組血脂有無差異;并觀察各組大鼠肝組織形態(tài)改變，比較各組大鼠肝臟PPARα

3、、ABCA1表達(dá)有無差異（免疫組化法）。
　　結(jié)果:
　　一、血脂分析:
　　1、間歇低氧組大鼠血CHOL水平較對照組明顯升高(10％ CIH-3周:2.46±0.14 VS2.09±0.18mmol/L;5％ CIH-3周:2.26±0.10 vs2.09±0.18mmol/L;P＜0.01）;復(fù)氧組大鼠血CHOL水平較CIH組明顯降低(10％復(fù)氧-6周VS10％CIH-3:1.63±0.05 VS2.46±0.14

4、mmol/L;5％復(fù)氧-6周VS5％CIH-3:1.70±0.22 VS2.26±0.10mmol/L; P＜0.01);10％復(fù)氧-6組大鼠血CHOL較對照-6組(1.63±0.05 VS1.67±0.24mmol/L，P＞0.05)無顯著性差異，認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平;5％復(fù)氧-6組大鼠血CHOL與對照-6組無顯著性差異(1.70±0.22 VS1.67±0.24mniol/L，P＞0.05)，認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平。
　　2、與對照

5、組大鼠比較，各組間TG無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05);
　　3、10％ CIH-3組大鼠血LDL-C水平較對照-3組明顯升高(0.33±0.06 VS0.23±0.05mmol/L，P＜0.01);5％ CIH-3組大鼠血LDL-C水平較對照-3組明顯升高(0.35±0.03 VS0.26±0.05mmol/L，P＜0.01);
　　復(fù)氧組大鼠血LDL-C水平較CIH組明顯降低（10％復(fù)氧-6周VS10％CIH-3:0.24±

6、0.02 VS0.33±0.06mmol/L;5％復(fù)氧-6周VS5％CIH-3:0.19±0.03 VS0.35±0.03mmol/L; P＜0.01);
　　10％復(fù)氧-6組大鼠血LDL-C較對照-6組升高但無顯著性差異，認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平(0.24±0.02 VS0.20±0.03 mmol/L，P＜0.01);5％復(fù)氧-6組大鼠血LDL-C較對照-6組升高但無顯著性差異，認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平(0.19±0.03 VS0.20±

7、0.03 mmol/L，P＜0.01)。
　　4、間歇低氧組大鼠血HDL-C水平對照組明顯降低(10％ CIH-3:0.40±0.05 VS0.53±0.05mmol/L;5％CIH-3:0.34±0.04 VS0.53±0.06mmol/L，P＜0.01);復(fù)氧組大鼠血HDL-C水平較CIH組明顯升高（10％復(fù)氧-6周VS10％CIH-3:0.52±0.04 VS0.40±0.05mmol/L;5％復(fù)氧-6周VS5％CIH-3:

8、0.48±0.04 VS0.34±0.04mmol/L; P＜0.01);10％復(fù)氧-6組大鼠血HDL-C較對照-6組(0.52±0.04 VS0.49±0.06mmol/L，p＞0.05)無顯著性差異，認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平;5％復(fù)氧-6組大鼠血HDL-C與對照-6組組無顯著性差異(0.48±0.04 VS0.49±0.05mniol/L，P＞0.05)，認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平。
　　三、PPARα、ABCA1免疫組化結(jié)果:
　　

9、1、間歇低氧組大鼠PPARα較對照組明顯降低(10％CIH-3:132.85±4.56 VS178.553±2.63;5％CIH-3:102.40±4.06 VS180.42±2.58，P＜0.01）;復(fù)氧組大鼠PPARα較CIH組明顯升高（10％復(fù)氧-6周VS10％CIH-3:175.23±5.34 VS132.85±4.56;5％復(fù)氧-6周VS5％CIH-3:168.70±6.12 VS102.40±4.06; P＜0.01）;10

10、％復(fù)氧-6組大鼠PPARα較對照-6組(175.23±5.34VS180.42±2.58，p＞0.05)無顯著性差異，認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平;5％復(fù)氧-6組大鼠PPARα較對照-6組無顯著性差異(168.70±6.12VS180.42±2.58，P＞0.05)，認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平。
　　2、間歇低氧組大鼠ABCA1較對照組明顯降低(10％CIH-3:202.85±12.50 VS318.62±13.60;5％CIH-3:172.24±

11、9.08 VS330.42±13.57，P＜0.01）;復(fù)氧組大鼠ABCA1較CIH組明顯升高(10％復(fù)氧-6周VS10％CIH-3:305.22±15.24 VS202.85±12.50; P＜0.01;5％復(fù)氧-6周VS5％CIH-3:301.72±12.22 VS172.24±9.08;P＜0.01);10％復(fù)氧-6組大鼠ABCA1較對照-6組(305.22±15.24 VS330.42±13.57(p＞0.05)無顯著性差異，認(rèn)

12、為恢復(fù)至常氧水平;5％復(fù)氧-6組大鼠ABCA1與對照-6組無顯著性差異(301.72±12.22 VS330.42±13.57，P＞0.05)，認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平。
　　結(jié)論:
　　1、OSAHS模式的CIH大鼠模型可致血清LDL-C和CHOL升高、HDL-C降低，而TG的結(jié)果分析無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　2、復(fù)氧干預(yù)后可有效提高HDL-C水平;
　　3、OSAHS模式的CIH大鼠模型可能通過PPARα-AB CA1通

13、路導(dǎo)致HDL紊亂，復(fù)氧3周干預(yù)治療可有效使大鼠PPARα、ABCA1表達(dá)水平基本恢復(fù)至常氧水平，提示CIH只要及時(shí)得到干預(yù)治療就有可能逆轉(zhuǎn)其造成的肝臟PPARα、ABCA1改變，從而逆轉(zhuǎn)血脂紊亂。
　　第二部分間歇低氧對HepG2細(xì)胞中HDL相關(guān)蛋白PPARα、ABCA1、apoM表達(dá)的影響及機(jī)制研究
　　目的:
　　本研究擬通過建立HepG2細(xì)胞慢性間歇低氧模型，用分子生物學(xué)方法從細(xì)胞學(xué)水平探討不同濃度OSAHS模式

14、CIH環(huán)境下HepG2細(xì)胞PPARα、 AB CA1及apoM mRNA及蛋白的變化，探討OSAHS模式慢性間歇性低氧對HDL代謝的上游PPARα，ABCA1，apoM調(diào)控途徑的可能的影響，從而探討CIH相關(guān)HDL代謝紊亂的發(fā)病機(jī)制，為臨床預(yù)防及治療OSAHS與高脂血癥提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　建立間歇低氧培養(yǎng)HepG2細(xì)胞模型，設(shè)立三組，分別為對照(A組)、10％間歇低氧（B組）、5％間歇低氧（C組）3組。通過光鏡觀

15、察細(xì)胞生長形態(tài)，油紅O染色法檢測細(xì)胞脂變率。采用RT-PCR檢測各組細(xì)胞PPARα、ABCA1及apoM mRNA表達(dá);并用蛋白印跡法檢測各組PPARα、ABCA1及apoM蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、間歇低氧培養(yǎng)下HepG2細(xì)胞生長速度明顯緩慢，出現(xiàn)脂變，與間歇低氧程度相關(guān);10％間歇低氧（B組）、5％間歇低氧（C組）細(xì)胞存活率分別為(80.1±2.1)％、(48.3±2.3)％.與A組相比，B、C細(xì)胞存活率明顯降低，

16、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，兩組間歇低氧組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。間歇低氧以濃度依賴性方式抑制HepG2細(xì)胞生長，HepG2細(xì)胞存活率與間歇低氧嚴(yán)重程度相關(guān)。
　　2、RT-PCR顯示B、C組細(xì)胞PPARα、ABCA1及apoM mRNA表達(dá)較A組減少(p＜0.01)，且C組低于B組(p＜0.05)。
　　3、Western blot檢測顯示B、C組HepG2的PPARα、ABCA1及apoM蛋白表達(dá)降低(p＜

17、0.01);且C組低于B組(p＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　OSAHS模式間歇低氧誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞脂肪變性;OSAHS模式間歇低氧可能通過誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞PPARα、ABCA1、apoM表達(dá)的減少參與HDL代謝紊亂。
　　第三部分 OSAHS患者血清apoM、apoA5水平與HDL關(guān)系及nCPAP干預(yù)研究
　　目的:
　　本研究擬觀察阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(OSAHS)患者的血清HDL與血清a

18、poM、apoA5水平以及nCPAP治療干預(yù)作用，OSAHS相關(guān)脂代謝紊亂的進(jìn)一步深入研究以及診治提供新的理論方向。
　　方法:
　　1、隨機(jī)選擇18例確診的中、重度OSAHS患者和18例性別、年齡、體重指數(shù)、疾病分布相匹配的對照者。檢測并分析比較兩組。血脂及血清apoM、apoA5水平有無差異。通過對18例中、重度OSAHS患者進(jìn)行nCPAP治療3月，比較治療前后患者上述指標(biāo)有無差異。
　　結(jié)果:
　　1、OS

19、AHS組患者的AHI和血清TG水平高于對照組(P＜0.05)，HDL-C、apoM、apoA5水平低于對照組(P＜0.05)，夜間平均Sa02、最低Sa02明顯低于對照者(P＜0.05)，但兩組CHOL、LDL-C無差異性(P＞0.05);
　　2、所有研究對象血清TG與AHI呈正相關(guān)，HDL-C、apoM、apoA5與AHI呈負(fù)相關(guān);所有研究對象血清TG與夜間平均Sa02、最低Sa02呈負(fù)相關(guān)，而HDL-C、apoM、apoA5

20、與夜間平均Sa02、最低Sa02呈正相關(guān)(P＜0.05);
　　3、ApoM與apoA5與HDL-C均呈正相關(guān)(P＜0.001); ApoM與apoA5之間呈正相關(guān)(r=0.536，P0.001)。多元逐步回歸分析顯示apoM與平均Sa02有良好的相關(guān)性(P＜0.01)，ApoA5與平均Sa02有良好的相關(guān)性(P＜0.01)。
　　4、中、重度OSAHS患者nCPAP治療3月后血清TG水平均較前明顯降低(P＜0.05)，HD