膽紅素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶1A1(UGT1A1)與原發(fā)性肝內(nèi)膽管結(jié)石關(guān)系的研究.pdf

1、目的:膽紅素葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶( Bilirubin UDP-glucuronsytransferase B-UGT)是膽紅素代謝的關(guān)鍵酶,其編碼基因為UGT1A1。既往實驗研究提示B-UGT活性降低可能是導致膽汁中單結(jié)合膽紅素增多,形成致石膽汁的重要原因。本實驗觀察原發(fā)性肝內(nèi)膽管結(jié)石(Primary Intrahepatic Stones PIS)患者肝細胞內(nèi)膽紅素葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶基因UGT1A1 mRNA及其蛋白(B-UGT)表達

2、情況,在基因水平探索PIS的發(fā)病機理及調(diào)控機制
　　對象與方法:1、以肝內(nèi)膽管結(jié)石病患者肝臟為標本,取33例肝內(nèi)膽管結(jié)石患者肝臟(HS組),其中男性患者19人,女性14人。15例非PIS患者肝臟(其中肝囊腫患者8人,肝血管瘤6人,肝癌1人,男性9人,女性6人)為對照組(NS組)。在術(shù)中將肝組織切下后,立即切除適當大小裝入凍存管,急送瀘州醫(yī)學院附屬醫(yī)院中心實驗室-80度保存。2、肝臟細胞內(nèi)UGT1A1基因mRNA表達量測定:以GAP

3、DH為內(nèi)參照,采用Real time PCR方法檢測(SYBR Green相對定量法)UGT1A1基因 mRNA的表達量。上游引物序列為TGCCCACTGTATTCTTCTTGC(5’-3’),下游引物序列為TTCTGTGAAAAGGCAATGAGC(5’-3’)。根據(jù)標準曲線和樣本 PCR反應(yīng)Ct值,用Bio-Rad iQ5軟件分析計算mRNA表達量。3、UGT1A1基因蛋白(B-UGT)表達量的檢測:以β-actin為內(nèi)參,抗體選擇

4、美國ABCAM公司產(chǎn)品UGT1A1(AB62600),采用Western blot法檢測上述基因所編碼蛋白表達量。圖像結(jié)果使用Bio-Rad凝膠攝像分析系統(tǒng)及Quantity One4.4.0軟件分析計算相關(guān)蛋白的表達量。檢測術(shù)前患者空腹12小時以上血清生化指標:總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素、總膽固醇、甘油三酯、總膽汁酸、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白
　　結(jié)果:1、血清生化指標分析:HS組血清總膽固醇、甘油三酯、總膽汁酸、高密度

5、低蛋白、低密度脂蛋白、總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素均低于對照NS組,但差異無統(tǒng)計學意義。2、HS組UGT1A1mRNA表達量為10.246±2.151,NS組為1.000±0.242,HS組UGT1A1mRNA表達量顯著高于對照組,t=2.89,P=0.018;3、HS組UGT1A1蛋白(B-UGT)表達量為1.059±0.232,NS組為0.835±0.007,HS組 UGT1A1蛋白(B-UGT)表達量高于對照組,t=2.487

6、,p=0.020。3、PIS患者UGT1A1基因 mRNA表達量與蛋白(B-UGT)表達量呈正相關(guān)(r=0.996, P=0.000),相關(guān)系數(shù)有統(tǒng)計學意義。血清膽固醇、總膽汁酸、總膽紅素、間接膽紅素、高密度脂蛋白以及低密度脂蛋白與 mRNA、蛋白(B-UGT)表達量呈負相關(guān),但相關(guān)系數(shù)無統(tǒng)計學意義(r<0,P>0.05)。甘油三酯及直接膽紅素與mRNA及其蛋白(B-UGT)表達量呈正相關(guān),但相關(guān)系數(shù)無統(tǒng)計學意義(r>0,P>0.05)