擬康氏木霉胞外多糖對小鼠的免疫增強活性研究.pdf

1、生物活性多糖是目前研究廣泛的一種生物反應調(diào)節(jié)劑。由于具有良好的免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤能力，一些從真菌中提取的多糖已經(jīng)開發(fā)成免疫增強及抗腫瘤藥物應用于臨床。本實驗室分離得到一株擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoning iiSDTP1)，從其發(fā)酵液中提取出的胞外多糖成分，經(jīng)過前期試驗證實，對多種植物病原菌有較強的拮抗作用；能促進小鼠脾淋巴細胞的體外增殖，同時還能提高巨噬細胞的吞噬功能及其產(chǎn)NO的產(chǎn)量。本實驗室進一步從擬康氏木霉

2、胞外多糖中分離純化到一種均一多糖(TPS1-1)，分子量為31930 Da，單糖組成及摩爾比為鼠李糖：木糖：果糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖=16.2:14.4:1:25.8:23.6:48.1。通過小鼠體外細胞試驗及體內(nèi)動物模型實驗，研究了其對免疫細胞以及正常小鼠和免疫低下模型小鼠免疫功能的影響。
　　 1.體外實驗中，用MTT法和ELISA法分別研究了TPS1-1直接及協(xié)同有絲分裂源ConA或LPS對小鼠脾淋巴細胞的增殖及分泌I

3、L-2的影響；分別用中性紅比色法、pNPP法和Griess試劑法測定了TPS1-1對腹腔巨噬細胞吞噬功能、酸性磷酸酶的含量及NO含量的影響。結(jié)果表明，TPS1-1單獨作用時，在25-400μg/mL濃度范圍內(nèi)均能顯著刺激小鼠脾淋巴細胞增殖，呈劑量依賴性；在6.25-400μg/mL范圍內(nèi)，TPS1-1可協(xié)同ConA或LPS刺激小鼠脾淋巴細胞增殖，均達到極顯著性差異；TPS1-1可提高小鼠脾淋巴細胞分泌IL-2，在1001μg/mL時多糖

4、處理組的分泌量與對照組相比提高了140.0％。TPS1-1可顯著促進巨噬細胞的吞噬作用，200μg/mL多糖處理組與對照相比，吞噬活性提高了14.0％；在25-800μg/mL范圍內(nèi)TPS1-1對巨噬細胞NO產(chǎn)生量有顯著提高；6.25-400μg/mL范圍內(nèi)TPS1-1均能極顯著地增加巨噬細胞酸性磷酸酶的活性，400μg/mL處理組與對照組相比，提高了137.0％。這些結(jié)果表明TPS1-1能激發(fā)巨噬細胞和脾淋巴細胞的活性，對免疫細胞具有

5、良好的刺激作用。
　　 2.體內(nèi)實驗中，研究了TPS1-1對正常小鼠及免疫低下模型小鼠免疫功能的影響。利用可損傷免疫器官，抑制體液免疫及細胞免疫，導致小鼠免疫缺陷的環(huán)磷酰胺構(gòu)建免疫低下小鼠動物模型。本實驗中，模型鼠特異性細胞免疫、臟器指數(shù)、細胞因子分泌、T淋巴細胞增殖、耐力等指標均低于正常小鼠，說明造模成功。結(jié)果表明，50、100、200 mg/kg/day的TPS1-1灌胃處理7天，顯著提高了正常鼠血清中IL-2及TNF-α含

6、量，與對照相比，分別平均提高16.0％和17.0％；增加了模型小鼠血清中IL-2及TNF-α的含量，與陰性對照組相比，最高分別提高10.0％和32.5％；TPS1-1能顯著提高正常小鼠及免疫低下小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應的足趾增厚度，與對照相比，最高增幅分別達到97.0％和350.0％；TPS1-1能夠延長環(huán)磷酰胺致免疫低下模型小鼠游泳時間，對其脾淋巴細胞增殖和臟器指數(shù)均有良好的提高和促進作用。以上結(jié)果表明，TPS1-1對正常小鼠及免疫低下模型