擬康氏木霉胞外多糖對(duì)小鼠的免疫增強(qiáng)活性研究.pdf

1、生物活性多糖是目前研究廣泛的一種生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。由于具有良好的免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤能力，一些從真菌中提取的多糖已經(jīng)開發(fā)成免疫增強(qiáng)及抗腫瘤藥物應(yīng)用于臨床。本實(shí)驗(yàn)室分離得到一株擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoning iiSDTP1)，從其發(fā)酵液中提取出的胞外多糖成分，經(jīng)過前期試驗(yàn)證實(shí)，對(duì)多種植物病原菌有較強(qiáng)的拮抗作用；能促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的體外增殖，同時(shí)還能提高巨噬細(xì)胞的吞噬功能及其產(chǎn)NO的產(chǎn)量。本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步從擬康氏木霉

2、胞外多糖中分離純化到一種均一多糖(TPS1-1)，分子量為31930 Da，單糖組成及摩爾比為鼠李糖：木糖：果糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖=16.2:14.4:1:25.8:23.6:48.1。通過小鼠體外細(xì)胞試驗(yàn)及體內(nèi)動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)，研究了其對(duì)免疫細(xì)胞以及正常小鼠和免疫低下模型小鼠免疫功能的影響。
　　 1.體外實(shí)驗(yàn)中，用MTT法和ELISA法分別研究了TPS1-1直接及協(xié)同有絲分裂源ConA或LPS對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖及分泌I

3、L-2的影響；分別用中性紅比色法、pNPP法和Griess試劑法測(cè)定了TPS1-1對(duì)腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能、酸性磷酸酶的含量及NO含量的影響。結(jié)果表明，TPS1-1單獨(dú)作用時(shí)，在25-400μg/mL濃度范圍內(nèi)均能顯著刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，呈劑量依賴性；在6.25-400μg/mL范圍內(nèi)，TPS1-1可協(xié)同ConA或LPS刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，均達(dá)到極顯著性差異；TPS1-1可提高小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2，在1001μg/mL時(shí)多糖

4、處理組的分泌量與對(duì)照組相比提高了140.0％。TPS1-1可顯著促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬作用，200μg/mL多糖處理組與對(duì)照相比，吞噬活性提高了14.0％；在25-800μg/mL范圍內(nèi)TPS1-1對(duì)巨噬細(xì)胞NO產(chǎn)生量有顯著提高；6.25-400μg/mL范圍內(nèi)TPS1-1均能極顯著地增加巨噬細(xì)胞酸性磷酸酶的活性，400μg/mL處理組與對(duì)照組相比，提高了137.0％。這些結(jié)果表明TPS1-1能激發(fā)巨噬細(xì)胞和脾淋巴細(xì)胞的活性，對(duì)免疫細(xì)胞具有

5、良好的刺激作用。
　　 2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，研究了TPS1-1對(duì)正常小鼠及免疫低下模型小鼠免疫功能的影響。利用可損傷免疫器官，抑制體液免疫及細(xì)胞免疫，導(dǎo)致小鼠免疫缺陷的環(huán)磷酰胺構(gòu)建免疫低下小鼠動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)中，模型鼠特異性細(xì)胞免疫、臟器指數(shù)、細(xì)胞因子分泌、T淋巴細(xì)胞增殖、耐力等指標(biāo)均低于正常小鼠，說明造模成功。結(jié)果表明，50、100、200 mg/kg/day的TPS1-1灌胃處理7天，顯著提高了正常鼠血清中IL-2及TNF-α含

6、量，與對(duì)照相比，分別平均提高16.0％和17.0％；增加了模型小鼠血清中IL-2及TNF-α的含量，與陰性對(duì)照組相比，最高分別提高10.0％和32.5％；TPS1-1能顯著提高正常小鼠及免疫低下小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的足趾增厚度，與對(duì)照相比，最高增幅分別達(dá)到97.0％和350.0％；TPS1-1能夠延長環(huán)磷酰胺致免疫低下模型小鼠游泳時(shí)間，對(duì)其脾淋巴細(xì)胞增殖和臟器指數(shù)均有良好的提高和促進(jìn)作用。以上結(jié)果表明，TPS1-1對(duì)正常小鼠及免疫低下模型