胎盤生長因子在胎兒生長受限中作用的研究.pdf

1、目的：胎兒生長受限是圍產(chǎn)期的重要并發(fā)癥之一，不僅影響胎兒的發(fā)育，遠(yuǎn)期也影響兒童期及青春期的體能與智能發(fā)育，且FGR的患兒在成人后發(fā)生心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)及內(nèi)分泌等方面疾病的機(jī)會(huì)大于正常者。FGR的病因國內(nèi)外已有較多的研究，但目前病因仍不明確。國內(nèi)外多項(xiàng)研究表明，胎兒生長受限時(shí)，胎盤絨毛發(fā)育及絨毛血管擴(kuò)張不良，同時(shí)蛻膜組織中螺旋動(dòng)脈擴(kuò)張不良，這導(dǎo)致子宮胎盤血流灌注不良，最終造成胎兒宮內(nèi)慢性缺氧，影響胎兒生長發(fā)育。近年來的研究發(fā)現(xiàn)胎盤的生長

2、和發(fā)育與多種生長因子有關(guān)。胎盤生長因子(PLGF)是一種屬于血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)家族成員的生長因子，主要在胎盤局部表達(dá)，對胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的生長和功能起著重要的調(diào)節(jié)作用。在胎盤形成過程中，PLGF能夠?qū)ψ甜B(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長、增殖、分化等功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，適量PLGF有利于胎兒胎盤血管網(wǎng)絡(luò)的形成，保證了胎兒生長發(fā)育的需要。本研究通過對胎兒生長受限時(shí)胎盤生長因

3、子在胎盤及胎盤床蛻膜組織中的表達(dá)，探索胎盤生長因子在胎兒生長受限發(fā)病中的作用。 方法：本研究分臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩部分。在臨床研究中，收集了50例孕婦剖宮產(chǎn)分娩前母血和分娩后臍血、胎盤組織及蛻膜組織，其中正常妊娠(正常組)20例，胎兒生長受限組(FGR組)15例，妊娠期高血壓疾病(hypertensiondisordercomplicatingpregnancy)(HDCP組)15例，通過酶聯(lián)免疫吸附法測定母血及臍血中PLGF的

4、水平，對各組胎盤及蛻膜組織進(jìn)行HE染色進(jìn)行普通病理分析；采用免疫組織化學(xué)法及分子原位雜交對各組胎盤及蛻膜組織中PLGF及PLGFmRNA的表達(dá)水平及表達(dá)部位進(jìn)行研究；采用半定量RT-PCR對組織中的PLGFmRNA表達(dá)水平進(jìn)行半定量分析。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，通過暫時(shí)阻斷卵巢動(dòng)脈成功構(gòu)建FGR動(dòng)物模型后，將健康成年雌性SD大鼠分為三組，分別為假手術(shù)組(ratnormalcontrol，RNC)、同體對照組(rathomogeneitycontra

5、st，RHC)、異體對照組(ratvariantcontrast，RVC)，每組各10只，成功交配后標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下飼養(yǎng)，每周測量體重。于妊娠第15天，實(shí)施手術(shù)，于妊娠第21天全部孕鼠施行剖宮產(chǎn)終止妊娠。對比各組中新生鼠仔體重、胎盤重量及鼠仔腦、心、肝、肺、腎的重量。同時(shí)于手術(shù)時(shí)取胎盤組織，分別行免疫組化、原位雜交及半定量RT-PCR進(jìn)行組織中PLGF及PLGFmRNA表達(dá)的分析。 結(jié)果：在臨床研究中，母體外周血及臍血ELISA測定結(jié)

6、果顯示，正常妊娠組高于FGR組及HDCP組(P＜0.01)。各組胎盤HE染色結(jié)果顯示，正常組足月胎盤組織中，絨毛發(fā)育良好，絨毛干血管擴(kuò)張明顯，間質(zhì)細(xì)胞少，可見較多的合體細(xì)胞結(jié)節(jié)及合體細(xì)胞橋。胎盤床蛻膜組織中可見一些滋養(yǎng)細(xì)胞及結(jié)構(gòu)清晰的螺旋小動(dòng)脈。FGR組及HDCP組胎盤絨毛發(fā)育欠佳，絨毛血管擴(kuò)張不良，間質(zhì)細(xì)胞增生，滋養(yǎng)細(xì)胞層的合體細(xì)胞結(jié)節(jié)及合體細(xì)胞橋較少。蛻膜組織中滋養(yǎng)細(xì)胞及螺旋小動(dòng)脈少見，擴(kuò)張不良。免疫組化及原位雜交結(jié)果顯示，PLGF

7、及PLGFmRNA主要在合體滋養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)，絨毛間質(zhì)及內(nèi)皮細(xì)胞中也有散在的表達(dá)，蛻膜細(xì)胞及少量滋養(yǎng)細(xì)胞中可見散在表達(dá)。FGR組與HDCP組胎盤絨毛和蛻膜PLGF及PLGFmRNA表達(dá)部位與正常妊娠組無差異，但表達(dá)的細(xì)胞少，且呈弱陽性表達(dá)。HDCP組及FGR組胎盤及蛻膜組織中PLGFmRNA表達(dá)量明顯低于正常組(P＜0.05=，但兩組間差異不顯著(P＞0.05)。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，各組孕鼠于妊娠各周體重增長相差不顯著(P＞0.05)。各

8、組間死胎率相差不顯著(P＞0.05)。假手術(shù)組(RNC)及同體對照組對照側(cè)(normalsideofRHCgroup，RHn)鼠仔體重、胎盤重量及新生胎仔腦、心、肺、肝、腎重量明顯高于異體對照組(RVC)及同體對照組實(shí)驗(yàn)側(cè)(FGRsideofRHCgroup，RHf)，相差均顯著(P＜0.01)。而RNC與RHn間、RVC與RHf間無明顯差異(P＞0.05)。胎盤組織病理結(jié)果顯示，RNC與RHn胎盤蛻膜帶較薄，主要由纖維性成分組成?；鶐?/p>

9、為數(shù)層滋養(yǎng)葉巨細(xì)胞及少量糖原細(xì)胞組成的網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)，母血即從中通過進(jìn)入迷路帶。RVC與RHf胎盤蛻膜帶腫脹增厚，炎性細(xì)胞浸潤；基帶滋養(yǎng)葉巨細(xì)胞增生，基帶增厚；迷路帶滋養(yǎng)葉細(xì)胞增生肥大，部分水腫，血間膜增厚，部分區(qū)域腫脹、變性、壞死，結(jié)構(gòu)不清。免疫組化、原位雜交及半定量RT-PCR結(jié)果顯示RNC與RHn胎盤PLGF及PLGFmRNA表達(dá)均明顯多于RVC與RHf(P＜0.05)，而RNC與RHn間、RVC與RHf間無明顯差異(P＞0.05)。

10、 結(jié)論：1.正常妊娠時(shí)，胎盤絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞合成并分泌PLGF，在絨毛間質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及蛻膜細(xì)胞中也有少量PLGF表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)FGR時(shí)，胎盤及蛻膜組織中PLGF的表達(dá)量明顯減少，且這種降調(diào)節(jié)發(fā)生在基因轉(zhuǎn)錄水平，國內(nèi)外相關(guān)報(bào)道較少。2.FGR時(shí)可導(dǎo)致死產(chǎn)、新生兒窒息等圍產(chǎn)兒并發(fā)癥或留下中樞神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，本研究發(fā)現(xiàn)FGR時(shí)孕晚期母體外周血及臍血中PLGF水平均明顯低于正常妊娠，這使得通過母血PLGF水平來間接評估胎盤功能狀態(tài)

11、或胎兒宮內(nèi)狀況成為可能，可以通過監(jiān)測孕婦血清PLGF的水平來指導(dǎo)產(chǎn)科醫(yī)生處理有關(guān)FGR等病理妊娠的臨床問題。3.根據(jù)大鼠子宮動(dòng)脈是卵巢動(dòng)脈的一個(gè)分支的解剖特點(diǎn)，本研究通過阻斷卵巢動(dòng)脈從而阻斷子宮動(dòng)脈血流，成功建立缺血缺氧性FGR孕鼠模型。該模型可顯著抑制胎兒的發(fā)育，胎兒體重、胎盤重量及胎兒各重要臟器的重量均明顯低于正常妊娠。該模型重復(fù)性好，操作簡便，并可成功設(shè)立同體對照，不僅克服了阻斷腹主動(dòng)脈構(gòu)建FGR模型不能設(shè)立自身對照的缺陷，也解決

12、了阻斷子宮動(dòng)脈構(gòu)建FGR模型技術(shù)要求高、不易推廣的問題，更具科學(xué)性和實(shí)用性，為進(jìn)行FGR相關(guān)的產(chǎn)科理論研究提供了一個(gè)有利的技術(shù)平臺。4.本研究通過FGR動(dòng)物模型造成子宮胎盤缺血缺氧的環(huán)境，導(dǎo)致胎盤PLGF合成及分泌減少，與離體實(shí)驗(yàn)中缺氧可下調(diào)PLGF表達(dá)的研究結(jié)果一致，表明缺氧所致的胎盤PLGF表達(dá)下降可能是FGR發(fā)病機(jī)制中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，其導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力下降，新生血管形成減少，可造成胎盤絨毛及其血管網(wǎng)絡(luò)發(fā)育不良，胎盤血