七氟烷預(yù)處理對窒息新生鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元自噬及遠期認(rèn)知功能的影響.pdf

1、目的：模擬出生窒息，建立新生大鼠窒息模型，研究新生大鼠窒息模型的可行性，并觀察七氟烷預(yù)處理對窒息新生大鼠海馬 CA1區(qū)神經(jīng)元自噬和遠期認(rèn)知功能的影響，探討七氟烷預(yù)處理可能的腦保護作用和機制。
　　方法：1、參考Grojean和余加林等人的方法，將7日齡（P7）的SD大鼠持續(xù)呼吸100％氮氣10min，建立新生大鼠窒息模型，并通過神經(jīng)行為學(xué)觀察、動脈血氣分析、短期神經(jīng)功能評價、腦水腫的測定以及光鏡下的形態(tài)學(xué)鑒定。
　　2、將2

2、82只7日齡大鼠隨機分成對照組（C組），缺氧組（H組），七氟烷預(yù)處理組（S組），采用免疫組化、western blot檢測自噬相關(guān)蛋白LC3的變化；HE染色和DAPI染色觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的病理變化；P21行懸吊實驗，P23行平衡木實驗，P28—P33行水迷宮實驗。
　　結(jié)果：1、7日齡大鼠持續(xù)呼吸100%氮氣10min作為造模缺氧時間，缺氧過程中大鼠皮膚紫紺，異常煩躁、肢體抽動、昏迷，二便失禁等異常的神經(jīng)行為學(xué)表現(xiàn)。大鼠隨缺

3、氧時間延長 SPO2下降，酸中毒，動脈血氧分壓降低和二氧化碳分壓升高。與正常組相比，模型組腦含水量升高（P<0.05）。與正常組相比，模型組完成趨地反射和懸崖逃避反射時間較長（P<0.05）。蘇木精素-伊紅染色顯示模型組大鼠皮質(zhì)和海馬神經(jīng)元嚴(yán)重損傷。
　　2、HE染色顯示C組海馬CA1區(qū)形態(tài)、細胞結(jié)構(gòu)正常；H組海馬CA1區(qū)結(jié)構(gòu)明顯異常，細胞排列紊亂，成片神經(jīng)元細胞核固縮；S組海馬CA1區(qū)異常程度較H組輕。DAPI染色顯示三組大鼠海

4、馬CA1區(qū)神經(jīng)元的細胞核形態(tài)改變的數(shù)量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；與C組比較，H組和S組CA1區(qū)發(fā)生細胞核形態(tài)改變的細胞數(shù)量明顯增多（P<0.05）；S組CA1區(qū)發(fā)生細胞核形態(tài)改變的細胞數(shù)量較H組少（P<0.05）。
　　海馬CA1區(qū)LC3-Ⅱ免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果：LC3-Ⅱ表達定位于神經(jīng)元的胞漿，C組各個時間點基本無陽性表達細胞；七氟烷預(yù)處理1h，30min后有少量陽性細胞表達（P<0.05）；與C組比較，H組和S組從缺氧后6h可見較多

5、LC3-Ⅱ陽性細胞表達，12h表達明顯增多，顏色變深，24h到達高峰，后逐漸下降，顏色變淺；S組缺氧后各個時間點LC3-Ⅱ陽性表達較H組少（P<0.05）。
　　LC3的western blot蛋白半定量結(jié)果：C組LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值在各時間點無明顯變化；七氟烷預(yù)處理1h，30min后，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值升高（P<0.05）；與C組比較，H組和S組缺氧后6h LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值升高，24h LC3-Ⅱ/

6、LC3-Ⅰ的比值達到最大值，后逐漸減小。與H組相比，S組缺氧后各時間點LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值較低（P<0.05）。
　　懸吊實驗和平衡木實驗，三組大鼠間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。水迷宮實驗定向航行中，與C組相比，H組和S組平均逃逸潛伏期時間明顯延長（P<0.05），與H組相比，S組第三天至第五天平均逃逸潛伏期時間較短（P<0.05）；與C相比，H組和S組穿越平臺次數(shù)明顯減少（P<0.05）；與H組相比，S組穿越平臺次數(shù)增多（P<