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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
探討七氟烷誘發(fā)大鼠海馬神經(jīng)元損傷是否與PARP-1/AIF細(xì)胞凋亡通路有關(guān);同時(shí)上調(diào)神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)Iduna表達(dá)水平,明確Iduna過(guò)表達(dá)是否可以減輕七氟烷所致大鼠海馬神經(jīng)元損傷。
方法:
分離出生24h內(nèi)的SD大鼠海馬組織,培養(yǎng)原代神經(jīng)元,采用隨機(jī)數(shù)字表法,將其分為4組:實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(C組)、七氟烷暴露組(S組)、陰性對(duì)照病毒感染+S組(ES組)、Iduna過(guò)表達(dá)+S組(IS組)。C組神經(jīng)元置于七氟烷
2、暴露組同樣的環(huán)境中,只吸入92%氧氣、5%二氧化碳混合氣體4h,不吸入七氟烷;S組神經(jīng)元暴露于濃度為3%七氟烷4h;ES組神經(jīng)元暴露于七氟烷前48h,加入陰性對(duì)照病毒;IS組神經(jīng)元暴露于七氟烷前48h,加入成功構(gòu)建的Iduna基因過(guò)表達(dá)重組質(zhì)粒,獲得外源性Iduna穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的神經(jīng)元。所有處理后的神經(jīng)元繼續(xù)正常培養(yǎng)24h后,進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。采用CCK-8法檢測(cè)神經(jīng)元活力;TUNEL檢測(cè)神經(jīng)元凋亡;通過(guò)乳酸脫氫酶(LDH)漏出率檢測(cè)神經(jīng)元
3、損傷程度;通過(guò)Western blot法檢測(cè)細(xì)胞色素C(CytC)、凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)和聚腺苷二磷酸核糖聚合物(PAR)表達(dá)水平;采用激光共聚焦顯微鏡觀察AIF和PARP-1表達(dá)分布變化。
結(jié)果:
與C組比較,S組和ES組神經(jīng)元存活率降低、神經(jīng)元凋亡率增加、LDH漏出率增加(P<0.05),S組和ES組神經(jīng)元PARP-1、PAR總蛋白表達(dá)增加(P<0.05),細(xì)胞核內(nèi)
4、AIF和細(xì)胞漿內(nèi)CytC表達(dá)增加(P<0.05),線粒體內(nèi)AIF和Cyt C表達(dá)減少(P<0.05)。S組與ES組比較各指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與ES組比較,IS組神經(jīng)元存活率升高、神經(jīng)元凋亡率減少、LDH漏出率降低(P<0.05),神經(jīng)元PARP-1、PAR總蛋白表達(dá)減少(P<0.05),細(xì)胞核內(nèi)AIF和細(xì)胞漿內(nèi)Cyt C蛋白表達(dá)減少(P<0.05),線粒體內(nèi)AIF和Cyt C表達(dá)增加(P<0.05)。熒光共聚焦顯示,C
5、組細(xì)胞中,代表AIF的紅色熒光幾乎全都定位于細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞質(zhì)呈紅色;S組和ES組細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的AIF部分遷移至細(xì)胞核,細(xì)胞核內(nèi)有紅色熒光表達(dá);IS組AIF大部分集中在細(xì)胞質(zhì)內(nèi),極少部分遷移細(xì)胞核內(nèi)。C組細(xì)胞中,代表PARP-1的綠色熒光幾乎全都定位于細(xì)胞核,細(xì)胞核有綠色熒光表達(dá);S組和ES組細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)均有綠色熒光表達(dá);IS組PARP-1大部分集中在細(xì)胞核內(nèi)。
結(jié)論:
七氟烷所致新生大鼠海馬神經(jīng)元毒性可能與激活PARP
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