上調(diào)Iduna對七氟烷所致大鼠海馬神經(jīng)元損傷的影響.pdf

1、目的：
　　探討七氟烷誘發(fā)大鼠海馬神經(jīng)元損傷是否與PARP-1/AIF細(xì)胞凋亡通路有關(guān);同時上調(diào)神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)Iduna表達(dá)水平，明確Iduna過表達(dá)是否可以減輕七氟烷所致大鼠海馬神經(jīng)元損傷。
　　方法：
　　分離出生24h內(nèi)的SD大鼠海馬組織，培養(yǎng)原代神經(jīng)元，采用隨機(jī)數(shù)字表法，將其分為4組：實驗對照組(C組)、七氟烷暴露組(S組)、陰性對照病毒感染+S組（ES組）、Iduna過表達(dá)+S組（IS組）。C組神經(jīng)元置于七氟烷

2、暴露組同樣的環(huán)境中，只吸入92％氧氣、5％二氧化碳混合氣體4h，不吸入七氟烷；S組神經(jīng)元暴露于濃度為3%七氟烷4h；ES組神經(jīng)元暴露于七氟烷前48h，加入陰性對照病毒；IS組神經(jīng)元暴露于七氟烷前48h，加入成功構(gòu)建的Iduna基因過表達(dá)重組質(zhì)粒，獲得外源性Iduna穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的神經(jīng)元。所有處理后的神經(jīng)元繼續(xù)正常培養(yǎng)24h后，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測。采用CCK-8法檢測神經(jīng)元活力；TUNEL檢測神經(jīng)元凋亡；通過乳酸脫氫酶（LDH）漏出率檢測神經(jīng)元

3、損傷程度；通過Western blot法檢測細(xì)胞色素C（CytC）、凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）和聚腺苷二磷酸核糖聚合物（PAR）表達(dá)水平；采用激光共聚焦顯微鏡觀察AIF和PARP-1表達(dá)分布變化。
　　結(jié)果：
　　與C組比較，S組和ES組神經(jīng)元存活率降低、神經(jīng)元凋亡率增加、LDH漏出率增加（P＜0.05），S組和ES組神經(jīng)元PARP-1、PAR總蛋白表達(dá)增加（P＜0.05），細(xì)胞核內(nèi)

4、AIF和細(xì)胞漿內(nèi)CytC表達(dá)增加（P＜0.05），線粒體內(nèi)AIF和Cyt C表達(dá)減少（P＜0.05）。S組與ES組比較各指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與ES組比較，IS組神經(jīng)元存活率升高、神經(jīng)元凋亡率減少、LDH漏出率降低（P＜0.05），神經(jīng)元PARP-1、PAR總蛋白表達(dá)減少(P＜0.05），細(xì)胞核內(nèi)AIF和細(xì)胞漿內(nèi)Cyt C蛋白表達(dá)減少(P＜0.05），線粒體內(nèi)AIF和Cyt C表達(dá)增加（P＜0.05）。熒光共聚焦顯示，C

5、組細(xì)胞中，代表AIF的紅色熒光幾乎全都定位于細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞質(zhì)呈紅色；S組和ES組細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的AIF部分遷移至細(xì)胞核，細(xì)胞核內(nèi)有紅色熒光表達(dá)；IS組AIF大部分集中在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，極少部分遷移細(xì)胞核內(nèi)。C組細(xì)胞中，代表PARP-1的綠色熒光幾乎全都定位于細(xì)胞核，細(xì)胞核有綠色熒光表達(dá)；S組和ES組細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)均有綠色熒光表達(dá)；IS組PARP-1大部分集中在細(xì)胞核內(nèi)。
　　結(jié)論：
　　七氟烷所致新生大鼠海馬神經(jīng)元毒性可能與激活PARP