馬拉色菌屬分型及基因多態(tài)性研究.pdf

1、馬拉色菌是一種重要的醫(yī)學(xué)真菌,包含7個種.它們在細(xì)胞和菌落形態(tài),G+C含量,細(xì)胞核型,26S核糖體大亞基DNA序列,對長鏈脂肪酸的需求,過氧化氫酶活性以及最適溫度上有所區(qū)別.目前對馬拉色菌的分型主要有傳統(tǒng)的生化方法(過氧化氫酶試驗、吐溫試驗、七葉苷試驗、蓖麻油試驗等)和分子生物學(xué)方法(包括RAPD、PCR-RFLP、PFGE和26S rDNA序列分析等),但是問題在于方法越多,標(biāo)準(zhǔn)就越混亂.而且近年來發(fā)現(xiàn)馬拉色菌存在較為明顯的多態(tài)性現(xiàn)象

2、,使其分子生物學(xué)分型結(jié)果的可靠性發(fā)生了偏差.本試驗從三個角度對馬拉色菌的分型、其基因多態(tài)性及其機制進(jìn)行了分析.1.研究用PCR-RFLP方法對馬拉色菌臨床株的快速分類,并結(jié)合生化鑒定結(jié)果分析結(jié)果的可靠性.先用吐溫試驗和過氧化氫酶試驗對74株分離自花斑癬病人的馬拉色菌臨床株進(jìn)行分型,并用7株標(biāo)準(zhǔn)菌株作對照.再用特異性引物擴(kuò)增馬拉色菌的28S rDNA,對擴(kuò)增產(chǎn)物分別用Eco88Ⅰ、Bsp143Ⅱ和BshNI3種限制性內(nèi)切酶進(jìn)行RFLP分析

3、.2.馬拉色菌屬已被分為7個種.盡管傳統(tǒng)的生化方法已被用于菌種分型,分子生物學(xué)技術(shù),尤其是RAPD也常常用作這7個種的鑒定.但是RAPD分型的可靠性至今無人明確驗證.本試驗對74株馬拉色菌臨床株進(jìn)行生化分型,并同時使用兩種隨機引物對其進(jìn)行RAPD分型.3.在分析試驗2的基礎(chǔ)上進(jìn)一步對其中7株糠秕馬拉色菌(c46,c71,c82,c95,d2,d6,d23,e5和e17)的ITS1區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增.c71在S33進(jìn)行的RAPD分型中被歸入別的種