miR-181a--CARF靶向關(guān)系在胰腺癌中的研究.pdf

1、目的：
　　 研究miR-181a在胰腺癌中的表達情況，驗證miR-181a與CARF基因的靶向關(guān)系，并探討其在該疾病中的功能，為闡明胰腺癌發(fā)病機制，尋求有效的治療途徑提供理論和實驗依據(jù)。
　　 材料和方法：
　　 采用實時熒光定量PCR技術(shù)，檢測并比較胰腺癌組織/細胞與正常胰腺組織/細胞中miR-181a的表達情況，通過轉(zhuǎn)染miR-181a inhibitor下調(diào)PancⅠ胰腺癌細胞中miR-181a的濃度，分

2、別用MTT試驗評價腫瘤細胞增殖能力和FCM檢測細胞凋亡狀況。在生物信息學(xué)靶基因預(yù)測的基礎(chǔ)上，構(gòu)建攜帶CARF基因3’-UTR序列的PGL-3報告基因載體，利用雙熒光素酶報告基因技術(shù)，驗證miR-181a與CARF基因的靶向關(guān)系。同時，通過轉(zhuǎn)染成熟hsa-miR-181a和miR-181a inhibitor分別上調(diào)和下調(diào)PancⅠ細胞中miR-181a的濃度，觀察CARF基因在轉(zhuǎn)錄及翻譯水平的變化。用經(jīng)上述處理的PancⅠ細胞建立裸鼠胰

3、腺癌皮下移植瘤模型，觀察miR-181a濃度變化對PancⅠ細胞體內(nèi)成瘤能力的影響，并檢測移植瘤中CARF基因在翻譯及轉(zhuǎn)錄水平的表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 (1)相對于正常胰腺組織和器官，胰腺癌組織和細胞中miR-181a的表達水平明顯升高(p<0.05)。PancⅠ細胞轉(zhuǎn)染miR-181a inhibitor后，PancⅠ胰腺癌細胞中miR-181a的表達水平明顯下調(diào)，MTT及FCM檢測結(jié)果顯示該組細胞相對于對照組

4、細胞的增殖能力顯著下降，細胞凋亡率明顯上升。(2)基因測序結(jié)果表明，攜帶CARF基因3’-UTR序列的PGL-3報告基因載體構(gòu)建成功，與成熟hsa-miR-181a共轉(zhuǎn)于細胞后，熒光素酶活性較對照組明顯下降，且與hsa-miR-181a濃度呈明顯負相關(guān)；miR-181a濃度與CARF蛋白表達水平呈顯著負相關(guān)，而與CARF mRNA水平無明顯相關(guān)性。(3)經(jīng)轉(zhuǎn)染成熟hsa-miR-181a和miR-181ainhibitor的PancⅠ細