MiR-195在胰腺癌中的表達(dá)和功能的初步研究.pdf

1、背景和目的：
　　胰腺癌（Pancreatic carcinoma，PC）是最致命的惡性腫瘤之一，是全球癌癥相關(guān)死亡的第四大原因。胰腺癌確診之后，患者的中位生存期是2-8個月，五年生存率只有3％-6%左右。造成這種情況的最主要原因是大多數(shù)患者確診時已處于胰腺癌進(jìn)展期或晚期，或者已經(jīng)發(fā)生遠(yuǎn)處器官的轉(zhuǎn)移。胰腺癌的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前很多研究仍不是很清楚，因此迫切需要尋找新的診斷治療靶點(diǎn)，為胰腺癌患者的診斷和治療帶來曙光。近來發(fā)現(xiàn)的微小R

2、NA（miRNAs）能夠以一種新的方式調(diào)控基因表達(dá)，因此它也為癌癥的研究帶來了新的方法。MiRNAs是短的、非編碼的RNA分子，主要通過轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因的表達(dá)從而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，能調(diào)控多種癌基因和抑癌基因的表達(dá)。MiR-195被報(bào)道在多種腫瘤(肝癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腎上腺皮質(zhì)癌)中表達(dá)下調(diào)，被認(rèn)為有抑癌作用。但MiR-195在胰腺癌中的作用仍鮮有研究。本實(shí)驗(yàn)的目的旨在探索miR-195在胰腺癌（PC）發(fā)生發(fā)展過程中的功

3、能調(diào)控作用。
　　方法：提取人正常胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞系 HPDE，人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1、SW-1990、PANC03.27中的RNA，采用miRNA qRT-PCR的方法檢測細(xì)胞中miR-195的表達(dá)水平。我們使用miR-195 mimic來上調(diào)PANC-1細(xì)胞中的miR-195表達(dá)水平。通過miRNA qRT-PCR來檢測miR-195 mimic的轉(zhuǎn)染效果。采用細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步檢測miR-195

4、對胰腺癌Panc-1細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。利用miR-195 mimic轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞過表達(dá)miR-195，并通過定量PCR、Western Blot分析驗(yàn)證miR-195對其靶基因CDK4、CyclinE的mRNA和蛋白水平的影響。
　　結(jié)果： MiR-195在胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1、SW-1990、PANC03.27中的表達(dá)水平明顯低于人正常胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞系HPDE。在胰腺癌細(xì)胞系PANC-1細(xì)胞中,miR-195 mim

5、ic轉(zhuǎn)染能顯著提高miR-195的表達(dá)。與陰性對照組相比，通過轉(zhuǎn)染miR-195 mimic，胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期和遷移侵襲能力可被明顯抑制。在PANC-1細(xì)胞中，過表達(dá)miR-195可以下調(diào)其靶基因周期相關(guān)蛋白CDK4、CyclinE的表達(dá)。
　　結(jié)論： MiR-195的表達(dá)在胰腺癌細(xì)胞中顯著下調(diào)。過表達(dá)miR-195可以下調(diào)CDK4、CyclinE的表達(dá)從而抑制胰腺癌細(xì)胞Panc-1的細(xì)胞周期并進(jìn)一步抑制其增