紅花黃色素注射液對Heymann大鼠的保護(hù)作用以及對腎組織中基質(zhì)金屬蛋白酶系統(tǒng)的影響.pdf

1、目的:本研究通過應(yīng)用陽離子化牛血清白蛋白(C-BSA)誘導(dǎo)出Heymann大鼠模型,以鹽酸貝那普利為對照,探討紅花黃色素注射液對heymann大鼠的保護(hù)作用及對MMP-7、TIMP-1的影響,從而為其臨床上治療原發(fā)性膜性腎病提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論支持。
　　 方法:選用健康雄性SD大鼠40只,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周,化驗(yàn)?zāi)虻鞍钻幮?隨機(jī)選取十只作為正常對照組,其余三十只SD大鼠尾靜脈注射C-BSA復(fù)制Heymann大鼠模型,每周三次,連續(xù)注

2、射4周后,化驗(yàn)24小時(shí)尿蛋白定量,確認(rèn)造模成功后,將三十只heymann大鼠隨機(jī)分為模型組、貝那普利治療組、紅花黃色素治療組三組,每組各十只大鼠,貝那普利治療組給予鹽酸貝那普利10mg/kg/d灌胃,紅花黃色素治療組予以紅花黃色素注射液26.7mg/(kg·d)腹腔注射,正常組及模型組灌服等量的生理鹽水,各組大鼠正常進(jìn)食進(jìn)水,連續(xù)給藥四周。檢測尾靜脈注射C-BSA四周后及給藥治療四周后大鼠24h尿蛋白定量。檢測實(shí)驗(yàn)?zāi)└鹘M大鼠血清總蛋白(

3、TP)、白蛋白(ALB)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),隨后將大鼠處死,留取腎組織,光鏡、免疫熒光、電鏡觀察大鼠腎組織病理變化,原位雜交檢測基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-7(MMP-7)mRNA在腎組織中的表達(dá)情況,并用病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.24小時(shí)尿蛋白定量測定
　　 連續(xù)尾靜脈注射C-BSA4周后,與正常組

4、比較,造模組出現(xiàn)大量蛋白尿,具有顯著性差異(P＜0.05);給藥4周后,與模型組相比,貝那普利治療組及紅花黃色素治療組24小時(shí)尿蛋白定量明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),兩治療組間比較無明顯差異(P＞0.05)。
　　 2.連續(xù)給藥4周后各組生化指標(biāo)檢測
　　 與正常組相比,模型組、貝那普利治療組、紅花黃色素治療組血清TP、ALB均明顯降低TC、TG均明顯升高,有顯著性差異(P＜0.05);與模型組相比,貝那普利治

5、療組、紅花黃色素治療組血清TP、ALB均明顯升高TC、TG均明顯降低,有顯著性差異(P＜0.05);紅花黃色素治療組與貝那普利治療組相比差異性不明顯,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);各組大鼠血清BUN、Scr比較,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);
　　 3.腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察
　　 光鏡下觀察正常組構(gòu)無明顯改變。模型組大鼠經(jīng)Masson染色后可見腎小球體積相應(yīng)增大,腎小球基底膜呈現(xiàn)彌漫性增厚,腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性及顆

6、粒變性,腎間質(zhì)中有部分淋巴和單核細(xì)胞浸潤,纖維化。紅花黃色素治療組與貝那普利治療組大鼠腎小球體積僅可見輕微增大,球內(nèi)細(xì)胞有一定的增多。
　　 電鏡下觀察正常組大鼠腎組織內(nèi)存在極少量電子致密物沉積,足細(xì)胞足突排列整齊。模型組大鼠可見腎小球基底膜內(nèi)多數(shù)電子致密物沉積,電子致密物周圍大量基底膜增生,細(xì)膜基質(zhì)增生,足細(xì)胞足突彌漫融合。紅花黃色素治療組大鼠腎小球基底膜內(nèi)存在少數(shù)電子致密物沉積,部分足細(xì)胞足突開始出現(xiàn)彌漫融合。貝那普利治療組

7、大鼠腎小球基底膜內(nèi)電子致密物有一定沉積,電子致密物周圍基底膜增生增厚,部分足細(xì)胞足突呈現(xiàn)出彌漫融合。
　　 免疫熒光正常組大鼠表現(xiàn)無明顯表現(xiàn),模型組大鼠腎組織中可見IgG和C3呈細(xì)顆粒狀沿腎小球內(nèi)毛細(xì)血管壁及部分系膜區(qū)呈現(xiàn)不同程度的沉積。紅花黃色素治療組大鼠腎組織中僅可見輕度的IgG和C3沉積,貝那普利治療組大鼠腎組織中可見IgG和C3呈細(xì)顆粒狀沿腎小球毛細(xì)血管壁呈現(xiàn)少量沉積。
　　 4.腎組織中TIMP-1、MMP-7

8、 mRNA原位雜交檢測結(jié)果:
　　 TIMP-1 mRNA在正常組腎組織的腎小管上皮細(xì)胞、腎小球內(nèi)有少量表達(dá);在模型組和治療組腎小管上皮細(xì)胞和腎小球內(nèi)均有表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示,與正常組相比,模型組腎小球內(nèi)TIMP-1表達(dá)顯著增強(qiáng),有顯著性差異(P＜0.05),與模型組相比,治療組中TIMP-1有所下降,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P＜0.05),兩治療組之間比較無明顯差異(P＞0.05);MMP-7mRNA在正常組腎小管中有少量表達(dá),在

9、模型組和各治療組腎組織中均有表達(dá),主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞的胞漿和腎小球中,與正常組相比,模型組腎臟中MMP-7 mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.05),與模型組相比,兩治療組表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05),而兩治療組之間比較無顯著差異(P＞0.05)。與正常組相比,模型組中MMP-7/TIMP-1明顯降低(P＜0.05),與模型組相比,兩治療組中MM:P-7/TIMP-1恢復(fù)性上調(diào)(P＜0.05),兩治療組之間比較無顯著差異(P＞0.05)。