知母、黃柏及其藥對標準提取物的質(zhì)量控制研究.pdf

1、中藥質(zhì)量控制一直是中藥現(xiàn)代化研究領域的重點和難點問題。本課題以知母、黃柏藥材及其藥對標準提取物為具體研究對象，圍繞中藥質(zhì)量分析技術方法進行中藥指紋圖譜研究。由于中藥藥對的化學成分復雜，為了保證其質(zhì)量的穩(wěn)定性和均一性，需要建立一個有效的質(zhì)量控制方法進行全面、系統(tǒng)的檢測。中藥指紋圖譜能較為全面的反映藥材的內(nèi)在質(zhì)量，具有整體性、特征性和穩(wěn)定性等特點。在不清楚中藥全部化學成分的情況下，指紋圖譜可以反映物質(zhì)的群體特征，建立中藥指紋圖譜有助于更加有

2、效、全面的控制知母、黃柏藥材及其藥對的質(zhì)量穩(wěn)定以及臨床用藥的安全有效。 “藥對”，又稱對藥、對子，專指臨床上相對固定的兩味藥組成的方劑，是中藥復方配伍的最簡單、最基本和最常見的形式。其配伍符合中醫(yī)“七情合和”理論組合法度，具備了復方的基本主治功能，成為中醫(yī)遣方用藥的特色之一，具有緊扣病機、功用專一、藥簡力宏、療效確切等特點。 中藥復方配伍規(guī)律研究，是目前亟待解決的技術難題，從復方最小單位“藥對”入手研究配伍規(guī)律，符合從易

3、到難的研究思路，是復方研究的基礎所在。本課題以知母、黃柏及其藥對標準提取物為具體研究對象，以兩者的有效化學成分為主要考查指標，采用HPLC-DAD及HPLC-DAD-ELSD高效液相色譜法，配合已開發(fā)的相應軟件，對三者進行指紋圖譜研究，以期達到更加有效、全面的控制其制劑的質(zhì)量并建立完善的質(zhì)量標準，指導實際生產(chǎn)，控制生產(chǎn)環(huán)節(jié)，切實保證成品質(zhì)量的穩(wěn)定性及藥劑的安全性，為進一步研究中藥復方提供可能。 本實驗采用HPLC-DAD及HPL

4、C-DAD-ELSD法分別建立了知母藥材、黃柏藥材以及知母黃柏藥對標準提取物的標準指紋圖譜并對其主要有效成份進行含量測定；運用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A版軟件進行分析，對中藥材和藥對標準提取物的10批次以上的供試品進行相似度評價。為了確保制備工藝的科學性和穩(wěn)定性，根據(jù)中藥材和藥對的指紋圖譜，標定出了各圖譜之間的相關性。 實驗結(jié)果： (1)黃柏的質(zhì)量控制研究 結(jié)果表明，川黃柏有效成分總含量平均為4.9

5、3％，關黃柏平均含量只有1.51％。川黃柏鹽酸小檗堿平均含量為4.37％，遠遠高于關黃柏的平均含量0.879％，前者含量是后者的4.97倍。而川黃柏的鹽酸巴馬汀及黃柏內(nèi)酯的含量都很低，分別為0.025％和0.25％，關黃柏則分別有0.38％和1.2％，分別為川黃柏的15.03倍和5.12倍。川黃柏鹽酸藥根堿平均含量為0.041％，關黃柏為0.049％，兩者中都較少。黃柏的干、枝、根皮中都含有較高的鹽酸小檗堿，實驗結(jié)果表明在根皮中生物堿含

6、量要高于干皮，干皮又高于枝皮。建立了黃柏藥材HPLC指紋圖譜，采用相似度作為指紋圖譜評判參數(shù)，計算不同產(chǎn)地黃柏藥材HPLC指紋圖譜之間以及與對照指紋圖譜之間的相似度，采用SPSS聚類分析軟件進行指紋圖譜研究。確立了黃柏的指紋特征，將15個批次黃柏樣品明顯的分為川黃柏和關黃柏兩個種。 (2)知母的質(zhì)量控制研究 對17個不同產(chǎn)地的知母藥材測定結(jié)果表明，知母中黃酮類成分平均含量為1.79％；皂苷類成分平均含量為5.79％，與文

7、獻中報道到的6％左右結(jié)果相符，但藥材中六種活性成分特別是知母皂苷類成分的含量差異較大。雖然單個成分的差異較大，但藥材中黃酮類成分總量以及皂苷類成分的總量差別相對較小。從含量測定結(jié)果初步可以看出，河北產(chǎn)地知母的總皂苷含量以及總黃酮含量都高于其他產(chǎn)地，但就總黃酮類成分而言與其他產(chǎn)地的含量比較，差異并不明顯。含量測定結(jié)果也與指紋圖譜評價的聚類分析結(jié)果基本吻合。聚類分析軟件計算結(jié)果雖然不是非常簡單明了地對知母藥材進行聚類，但其將皂苷含量明顯較多

8、的河北產(chǎn)知母聚為最接近一類，將皂苷含量最低的山東、遼寧、寧夏、黑龍江、山西產(chǎn)知母聚為最接近一類。 (3)知母黃柏藥對標準提取物的質(zhì)量控制研究 建立了HPLC-DAD-ELSD含量測定方法，對10批次的知母黃柏藥對標準提取物中的芒果苷、新芒果苷、知母皂苷EⅠ、知母皂苷BⅡ、知母皂苷B和知母皂苷AⅢ及鹽酸黃柏堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿共10個成分的進行了同時含量測定。其次，建立了知母黃柏藥對標準提取物的HPLC指

9、紋圖譜，采用相似度作為指紋圖譜評判參數(shù)，計算不同批次知母黃柏藥對標準提取物的HPLC指紋圖譜之間以及與對照指紋圖譜之間的相似度。結(jié)果顯示，藥對標準提取物中各批次間總生物堿，總黃酮及總皂苷的差別較小，各批次基本持平，各批次間的相似度計算結(jié)果非常好。 實驗結(jié)論： (1)本課題所用的實驗方法科學、可靠，可用于對知母、黃柏藥材及藥對的定性定量研究。 (2)本課題研究結(jié)果對建立知母、黃柏藥材及藥對的科學質(zhì)量評價方法，指導實