知母、黃柏及其藥對(duì)標(biāo)準(zhǔn)提取物的質(zhì)量控制研究.pdf

1、中藥質(zhì)量控制一直是中藥現(xiàn)代化研究領(lǐng)域的重點(diǎn)和難點(diǎn)問題。本課題以知母、黃柏藥材及其藥對(duì)標(biāo)準(zhǔn)提取物為具體研究對(duì)象，圍繞中藥質(zhì)量分析技術(shù)方法進(jìn)行中藥指紋圖譜研究。由于中藥藥對(duì)的化學(xué)成分復(fù)雜，為了保證其質(zhì)量的穩(wěn)定性和均一性，需要建立一個(gè)有效的質(zhì)量控制方法進(jìn)行全面、系統(tǒng)的檢測。中藥指紋圖譜能較為全面的反映藥材的內(nèi)在質(zhì)量，具有整體性、特征性和穩(wěn)定性等特點(diǎn)。在不清楚中藥全部化學(xué)成分的情況下，指紋圖譜可以反映物質(zhì)的群體特征，建立中藥指紋圖譜有助于更加有

2、效、全面的控制知母、黃柏藥材及其藥對(duì)的質(zhì)量穩(wěn)定以及臨床用藥的安全有效。 “藥對(duì)”，又稱對(duì)藥、對(duì)子，專指臨床上相對(duì)固定的兩味藥組成的方劑，是中藥復(fù)方配伍的最簡單、最基本和最常見的形式。其配伍符合中醫(yī)“七情合和”理論組合法度，具備了復(fù)方的基本主治功能，成為中醫(yī)遣方用藥的特色之一，具有緊扣病機(jī)、功用專一、藥簡力宏、療效確切等特點(diǎn)。 中藥復(fù)方配伍規(guī)律研究，是目前亟待解決的技術(shù)難題，從復(fù)方最小單位“藥對(duì)”入手研究配伍規(guī)律，符合從易

3、到難的研究思路，是復(fù)方研究的基礎(chǔ)所在。本課題以知母、黃柏及其藥對(duì)標(biāo)準(zhǔn)提取物為具體研究對(duì)象，以兩者的有效化學(xué)成分為主要考查指標(biāo)，采用HPLC-DAD及HPLC-DAD-ELSD高效液相色譜法，配合已開發(fā)的相應(yīng)軟件，對(duì)三者進(jìn)行指紋圖譜研究，以期達(dá)到更加有效、全面的控制其制劑的質(zhì)量并建立完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，指導(dǎo)實(shí)際生產(chǎn)，控制生產(chǎn)環(huán)節(jié)，切實(shí)保證成品質(zhì)量的穩(wěn)定性及藥劑的安全性，為進(jìn)一步研究中藥復(fù)方提供可能。 本實(shí)驗(yàn)采用HPLC-DAD及HPL

4、C-DAD-ELSD法分別建立了知母藥材、黃柏藥材以及知母黃柏藥對(duì)標(biāo)準(zhǔn)提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜并對(duì)其主要有效成份進(jìn)行含量測定；運(yùn)用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版軟件進(jìn)行分析，對(duì)中藥材和藥對(duì)標(biāo)準(zhǔn)提取物的10批次以上的供試品進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)。為了確保制備工藝的科學(xué)性和穩(wěn)定性，根據(jù)中藥材和藥對(duì)的指紋圖譜，標(biāo)定出了各圖譜之間的相關(guān)性。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： (1)黃柏的質(zhì)量控制研究 結(jié)果表明，川黃柏有效成分總含量平均為4.9

5、3％，關(guān)黃柏平均含量只有1.51％。川黃柏鹽酸小檗堿平均含量為4.37％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于關(guān)黃柏的平均含量0.879％，前者含量是后者的4.97倍。而川黃柏的鹽酸巴馬汀及黃柏內(nèi)酯的含量都很低，分別為0.025％和0.25％，關(guān)黃柏則分別有0.38％和1.2％，分別為川黃柏的15.03倍和5.12倍。川黃柏鹽酸藥根堿平均含量為0.041％，關(guān)黃柏為0.049％，兩者中都較少。黃柏的干、枝、根皮中都含有較高的鹽酸小檗堿，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在根皮中生物堿含

6、量要高于干皮，干皮又高于枝皮。建立了黃柏藥材HPLC指紋圖譜，采用相似度作為指紋圖譜評(píng)判參數(shù)，計(jì)算不同產(chǎn)地黃柏藥材HPLC指紋圖譜之間以及與對(duì)照指紋圖譜之間的相似度，采用SPSS聚類分析軟件進(jìn)行指紋圖譜研究。確立了黃柏的指紋特征，將15個(gè)批次黃柏樣品明顯的分為川黃柏和關(guān)黃柏兩個(gè)種。 (2)知母的質(zhì)量控制研究 對(duì)17個(gè)不同產(chǎn)地的知母藥材測定結(jié)果表明，知母中黃酮類成分平均含量為1.79％；皂苷類成分平均含量為5.79％，與文

7、獻(xiàn)中報(bào)道到的6％左右結(jié)果相符，但藥材中六種活性成分特別是知母皂苷類成分的含量差異較大。雖然單個(gè)成分的差異較大，但藥材中黃酮類成分總量以及皂苷類成分的總量差別相對(duì)較小。從含量測定結(jié)果初步可以看出，河北產(chǎn)地知母的總皂苷含量以及總黃酮含量都高于其他產(chǎn)地，但就總黃酮類成分而言與其他產(chǎn)地的含量比較，差異并不明顯。含量測定結(jié)果也與指紋圖譜評(píng)價(jià)的聚類分析結(jié)果基本吻合。聚類分析軟件計(jì)算結(jié)果雖然不是非常簡單明了地對(duì)知母藥材進(jìn)行聚類，但其將皂苷含量明顯較多

8、的河北產(chǎn)知母聚為最接近一類，將皂苷含量最低的山東、遼寧、寧夏、黑龍江、山西產(chǎn)知母聚為最接近一類。 (3)知母黃柏藥對(duì)標(biāo)準(zhǔn)提取物的質(zhì)量控制研究 建立了HPLC-DAD-ELSD含量測定方法，對(duì)10批次的知母黃柏藥對(duì)標(biāo)準(zhǔn)提取物中的芒果苷、新芒果苷、知母皂苷EⅠ、知母皂苷BⅡ、知母皂苷B和知母皂苷AⅢ及鹽酸黃柏堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿共10個(gè)成分的進(jìn)行了同時(shí)含量測定。其次，建立了知母黃柏藥對(duì)標(biāo)準(zhǔn)提取物的HPLC指

9、紋圖譜，采用相似度作為指紋圖譜評(píng)判參數(shù)，計(jì)算不同批次知母黃柏藥對(duì)標(biāo)準(zhǔn)提取物的HPLC指紋圖譜之間以及與對(duì)照指紋圖譜之間的相似度。結(jié)果顯示，藥對(duì)標(biāo)準(zhǔn)提取物中各批次間總生物堿，總黃酮及總皂苷的差別較小，各批次基本持平，各批次間的相似度計(jì)算結(jié)果非常好。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論： (1)本課題所用的實(shí)驗(yàn)方法科學(xué)、可靠，可用于對(duì)知母、黃柏藥材及藥對(duì)的定性定量研究。 (2)本課題研究結(jié)果對(duì)建立知母、黃柏藥材及藥對(duì)的科學(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，指導(dǎo)實(shí)