Ad介導G250基因轉染DC激活免疫效應細胞治療腎癌的實驗研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學博士學位論文Ad介導G250基因轉染DC激活免疫效應細胞治療腎癌的實驗研究姓名：齊桓申請學位級別：博士專業(yè)：泌尿外科學指導教師：鄭少斌20070501中文摘要也不一致。目前抗原加載存在著多種手段，常用的策略有：抗原肽致敏D c 及病毒載體攜帶抗原基因轉染D c 兩種方式。采用腫瘤抗原肽致敏D c 雖有抗原比較特異，可多次免疫等優(yōu)點，但存在的主要問題是：這類抗原肽往往半衰期較短，因此需要多次免疫方可獲得良好活性的C T L ，

2、而且轉導效率低下．病素載體攜帶抗原肽基因轉染D c ，可使基因在D c 體內穩(wěn)定表達，從而使D c 獲得持續(xù)而大量的抗原肽刺激，有望解決單純抗原肽轉導存在的問題。目前轉染D c 常用的病毒載體有：逆轉錄病毒，腺病毒和慢病毒等。腺病毒載體( A d )是常用的病毒載體之一．腺病毒載體是5 型腺病毒基因重組而成的，由于其E l區(qū)的缺失，致使病毒的復制缺陷，不會引起宿主細胞的損傷或病毒擴散。展望與其它病毒載體的不同，腺病毒載體具有許多獨特的優(yōu)

3、點：①宿主范圍廣，對人致病性低；②在增殖和非增殖細胞中感染和表達基因；③能有效進行增殖，滴度高；④不整合到染色體，無插入突變性；⑤能同時表達多個基因。由于腺病毒載體具有諸多優(yōu)點，因此在研究中越來越多地被采用．在前期研究的基礎上，設計了以下三部分研究：( 1 ) 以腎腫瘤相關抗原G 2 5 0蛋白沖擊D c 誘導特異的C T L ，研究其對腎癌細胞株的殺傷情況。( 2 ) 以A d 為載體，將G 2 5 0 基因轉染D c 誘導C T L

4、 ，研究其對腎癌細胞株的殺傷情況，并與G 2 5 0蛋白誘導組作比較分析。( 3 ) 轉染A d ／G 2 5 0 的人樹突狀細胞誘導C T L 抑制人腎癌細胞系7 8 6 一O 裸鼠移植瘤發(fā)生與生長。通過以上三部分研究，探討以A d 為載體，將腎癌抗原基因轉染D c 并誘導C T L ，用于治療腎癌的可行性，在此基礎之上，優(yōu)化制備工藝，為臨床試用于抗原明確的腫瘤治療奠定實驗室基礎。第一部分6 2 5 0 蛋白致敏的D c 瘤苗體外誘導