B7-H4分子在腸癌細(xì)胞和間質(zhì)浸潤淋巴細(xì)胞表達(dá)的臨床意義和作用研究.pdf

1、負(fù)性共刺激分子B7-H4是2003年最新發(fā)現(xiàn)的B7家族的新成員。人B7-H4mRNA在正常組織中普遍表達(dá)，而B7-H4蛋白在正常組織中基本不表達(dá)。然而近年研究顯示，在多種腫瘤細(xì)胞如卵巢癌，胰腺癌，胃癌，腎癌細(xì)胞以及腫瘤浸潤免疫細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)有B7-H4的異常表達(dá)，提示正常組織能夠在轉(zhuǎn)錄后水平對B7-H4的表達(dá)進(jìn)行嚴(yán)格調(diào)控，而在腫瘤環(huán)境中這種調(diào)控機(jī)制受到抑制或發(fā)生改變。B7-H4能夠抑制CD3+T細(xì)胞浸潤，并誘導(dǎo)活化CTL凋亡，削弱機(jī)體的抗腫

2、瘤免疫應(yīng)答。同時(shí)，B7-H4分子還能保護(hù)腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視，為腫瘤免疫逃逸提供必要條件。臨床研究表明，B7-H4在腫瘤組織中表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)密切相關(guān)，且高表達(dá)B7-H4患者往往預(yù)后較差，生存率降低。隨著對B7-H4的深入研究，其作為負(fù)性共刺激分子在腫瘤免疫中的作用越來越受到關(guān)注。
　　 本研究通過檢測腸癌標(biāo)本B7-H4的表達(dá)以及T細(xì)胞、TAM的浸潤，分析腸癌組織B7-H4表達(dá)的臨床意義，并結(jié)合體外相關(guān)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步探討B(tài)7

3、-H4在腸癌細(xì)胞及浸潤淋巴細(xì)胞表達(dá)的意義和作用。
　　 第一部分負(fù)性共刺激分子B7-H4在結(jié)直腸癌和微環(huán)境中的表達(dá)及臨床意義
　　 [目的]分析人結(jié)直腸癌組織中腫瘤細(xì)胞及腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（Tumor-infiltrating lymphocyte，TIL）負(fù)性共刺激分子B7-H4的表達(dá)以及巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞及其亞群在腫瘤微環(huán)境中的浸潤，進(jìn)而探討其相關(guān)臨床意義。
　　 [方法]采用免疫組化SP法檢測98例人結(jié)直腸

4、癌組織中腫瘤細(xì)胞及浸潤淋巴細(xì)胞上B7-H4的表達(dá)以及巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞及其亞群的浸潤，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析B7-H4的表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)、預(yù)后、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(Tumor-associated macrophage，TAM)以及CD3+、CD8+T細(xì)胞浸潤程度的相關(guān)性。
　　 [結(jié)果]結(jié)直腸癌組織中異常表達(dá)B7-H4分子，而正常組織中基本不表達(dá)，并且在腫瘤細(xì)胞及浸潤淋巴細(xì)胞上均檢測到B7-H4的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，浸潤淋巴細(xì)胞B7-

5、H4的表達(dá)水平與患者年齡、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否為粘液腺癌有關(guān)(P＜0.5)，與患者總體生存率呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，且B7-H4高表達(dá)組織較B7-H4低表達(dá)組織CD3+T細(xì)胞高度浸潤例數(shù)顯著增加(P＜0.5);腸癌細(xì)胞中B7-H4的表達(dá)與患者腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及Duke's分期有關(guān)(P＜0.5)。
　　 [結(jié)論]人結(jié)直腸癌患者的腸癌細(xì)胞及浸潤淋巴細(xì)胞均異常表達(dá)B7-H4分子，CD3+T細(xì)胞的浸潤程度與浸潤淋巴

6、細(xì)胞B7-H4的表達(dá)呈顯著相關(guān)而與腫瘤細(xì)胞上B7-H4的表達(dá)無關(guān)。而腫瘤細(xì)胞表達(dá)B7-H4與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及Duke's分期相關(guān)。上述結(jié)果提示腫瘤細(xì)胞表達(dá)B7-H4與浸潤淋巴細(xì)胞表達(dá)B7-H4可能分別以不同機(jī)制參與了腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展，且對進(jìn)一步分析腫瘤組織中B7-H4在不同細(xì)胞表達(dá)的生物學(xué)和臨床意義具有重要的價(jià)值。
　　 第二部分 B7-H4分子在腫瘤細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞表達(dá)作用的研究
　　 [目的]

7、檢測表達(dá)B7-H4的單核巨噬細(xì)胞株U937與活化T細(xì)胞共培養(yǎng)后對T細(xì)胞增殖的影響以及表達(dá)B7-H4的腫瘤細(xì)胞在抗腫瘤藥物作用下的增殖凋亡情況，分析B7-H4在腫瘤細(xì)胞及TAM上表達(dá)的可能作用。
　　 [方法]從健康人外周血分離PBMC，免疫磁珠分選其中的T細(xì)胞，然后以單核巨噬細(xì)胞株U937與活化T細(xì)胞共培養(yǎng)檢測T細(xì)胞的增殖凋亡情況;以抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶干預(yù)293/B7-H4細(xì)胞株后檢測293細(xì)胞的增殖凋亡情況。
　　

8、 [結(jié)果]表達(dá)B7-H4的U937能抑制T細(xì)胞活化增殖并誘導(dǎo)其凋亡;表達(dá)B7-H4的293細(xì)胞能抵抗或部分抵抗抗腫瘤藥物的增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡。
　　 [結(jié)論]表達(dá)B7-H4的U937能抑制T細(xì)胞活化增殖并誘導(dǎo)其凋亡，提示B7-H4在單核巨噬細(xì)胞上的表達(dá)可能通過抑制T細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡從而發(fā)揮負(fù)性調(diào)控作用;表達(dá)B7-H4的293細(xì)胞能抵抗或部分抵抗抗腫瘤藥物的增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡，提示B7-H4在腫瘤細(xì)胞上的表達(dá)可能通過增強(qiáng)自身