ERFs參與調(diào)控黃瓜果實貯藏冷害機(jī)制研究.pdf

1、低溫貯藏是減輕果蔬采后貯運及物流損失的最有效方式，但很多果蔬特別是熱帶亞熱帶果蔬容易發(fā)生冷害，冷害成為果蔬采后低溫貯運的主要脅迫。黃瓜是典型的冷敏性果實，在貯藏溫度低于10℃時極易產(chǎn)生冷害，主要癥狀表現(xiàn)為果實水漬狀凹陷，失水嚴(yán)重，萎蔫變黃，清新氣味消失，從而影響果實的商品價值。ERF是一類植物特有的轉(zhuǎn)錄因子，在生物及非生物逆境中起著重要的作用，但其與黃瓜果實冷害的關(guān)系及其參與調(diào)控冷害的機(jī)制目前研究較少。為此，本實驗中，我們以“津冬”黃瓜

2、果實為材料，采用轉(zhuǎn)錄組測序（RNA-Seq）的方法，比較冷害過程中黃瓜果實轉(zhuǎn)錄水平基因表達(dá)的差異，重點關(guān)注ERF轉(zhuǎn)錄因子在黃瓜冷害及減輕冷害的進(jìn)程中的表達(dá)模式，獲得與冷害相關(guān)的ERF基因，分離其全長序列，并采用qRT-PCR方法驗證其表達(dá)特征，分析了ERF轉(zhuǎn)錄因子在黃瓜冷害及減輕冷害的進(jìn)程中的表達(dá)模式，同時采用酵母雙雜交的方法篩選與冷害相關(guān)ERFs互作的組蛋白去乙酰化酶基因HDACs，并用BiFC的方法進(jìn)行了體內(nèi)驗證，期望闡明 ERF轉(zhuǎn)

3、錄因子在黃瓜果實采后冷害過程中的作用及機(jī)制。
　　主要研究結(jié)果如下：
　　1．15℃冷鍛煉處理2d能夠減輕貯藏8℃條件下的黃瓜果實冷害，提高了黃瓜果實耐冷性。
　　2．對冷害過程中的黃瓜果實進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測序（RNA-Seq）,獲得了337個差異表達(dá)基因，其中29個ERF基因表達(dá)模式呈現(xiàn)差異，將其命名為CsERF1-29。同時，從NCBI中獲得了黃瓜所有的21個HDA基因家族成員，命名為CsHDA1-21以進(jìn)行后續(xù)研究。

4、
　　3．熒光定量分析表明，CsERFs和CsHDAs基因表達(dá)水平與黃瓜果實冷害有一定關(guān)系。qRT-PCR分析顯示，隨著低溫貯藏時間的延長，CsERF1、14、17、18、24、28、29和CsHDA3、7、8、17、18、21表達(dá)水平呈上調(diào)趨勢，而CsERF4、7、8、16、27則呈下調(diào)。表明，這些基因可能與黃瓜果實冷害相關(guān)。
　　4．采用RT-PCR與RACE相結(jié)合的方法，獲得了CsERF4、18、27、29和CsHDA