青海藏羊片形吸蟲生物學特性研究.pdf

1、本研究以青海藏羊體內(nèi)片形吸蟲和片形吸蟲中間宿主椎實螺為研究對象，結(jié)合形態(tài)學和分子分類學方法進行了螺體內(nèi)蚴蟲以及成蟲的蟲種分類、鑒定。采用壓片鏡檢的方法對青海省部分地區(qū)中間宿主螺、螺體內(nèi)蚴蟲感染率進行了調(diào)查，同時，用大蒜素和苦參堿兩種植物提取物對椎實螺進行了急性毒性試驗，以在實驗室條件下，篩選出殺死中間宿主螺的有效藥物。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴在椎實螺中收集到雷蚴、尾蚴并在培養(yǎng)青海蘿卜螺的水中收集到囊蚴。經(jīng)形態(tài)學初步鑒定三種蚴蟲

2、均為肝片吸蟲蚴蟲，進一步提取寄生于蚴蟲基因組DNA，對18S rRNA基因片段進行克隆與測序，對收集到的蚴蟲進行分子分類學鑒定，所測片段長度為1805bp，用DNAMAN進行序列比對分析，顯示與GenBank中的大片吸蟲(Fasciola gigantica)18S rRNA基因序列相似性為92.03％，與肝片吸蟲（Fasciola hepatica）的相似性為99.12％。綜合同源進化樹圖譜可以進一步確定所收集的蚴蟲為肝片吸蟲的蚴蟲。

3、⑵傳統(tǒng)的形態(tài)學鑒定方法無法對肝片吸蟲及大片吸蟲的中間種類進行分類鑒定，本試驗對其成蟲采用18S rRNA基因克隆及序列分析的方法，測出目的片段大小為1834bp。并將測得序列用DNAMAN軟件與GenBank中已發(fā)表的大片吸蟲的18S rRNA基因序列比對，其相似性為92.92％，與肝片吸蟲的18SrRNA基因序列相似性為99.78％，結(jié)合同源進化樹圖譜可以確定所采成蟲樣品為肝片吸蟲。⑶試驗中發(fā)現(xiàn)所調(diào)查地區(qū)的椎實螺主要有三個種，分別為青

4、海蘿卜螺（Radix cucnnorica）、橢圓蘿卜螺（Radix swinhoei）和狹蘿卜螺(Radix lagotis)。通過對螺體進行壓片鏡檢及在實驗室條件下培養(yǎng)椎實螺，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：橢圓蘿卜螺體內(nèi)未發(fā)現(xiàn)肝片吸蟲蚴蟲寄生，狹蘿卜螺體內(nèi)發(fā)現(xiàn)雷蚴寄生，感染率較低，10％。青海蘿卜螺體內(nèi)發(fā)現(xiàn)有雷蚴和尾蚴寄生，感染率較高，達41.33％，隨后在培養(yǎng)青海蘿卜螺的器皿中成功收集到囊蚴，而在狹蘿卜螺和橢圓螺的培養(yǎng)過程中并未收集到囊蚴。表明青海藏

5、羊肝片吸蟲的主要中間宿主螺為青海蘿卜螺。⑷利用大蒜素和苦參堿兩種植物提取物對椎實螺在實驗室條件下浸殺滅螺效果進行了試驗，研究發(fā)現(xiàn)，大蒜素經(jīng)48h，濃度為8mg/L的條件下，死亡率為70％；苦參堿經(jīng)96h，濃度為24mg/L的條件下，死亡率為100％。這兩種提取物的48h的半數(shù)致死濃度(LC50)分別為6.02mg/L和45.55mg/L。表明大蒜提取物對椎實螺的滅殺效果較苦參提取物的滅殺效果好，即椎實螺對大蒜提取物的抵抗能力比對苦參提取