活化二價鋅離子對堿燒傷后角膜融解病理機制中基質(zhì)金屬蛋白酶抑制作用的研究.pdf

1、目的:探討在堿燒傷后角膜融解損傷病理作用中不同時間內(nèi)起主要組織損傷作用的基質(zhì)金屬蛋白酶的類型;探討活化Zn2+離子對堿燒傷后角膜融解損傷不同時期異常高表達的基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制作用。
　　 方法:建立中度角膜堿燒傷小鼠實驗動物模型，應用明膠酶譜、蛋白質(zhì)印跡法以及免疫組織化學技術檢測堿燒傷后3日、1周以及1個月時角膜組織內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶-1，2及9的表達情況。應用不同濃度Zn2+離子溶液（0.1mmol/L及1mmol/L）對堿燒

2、傷后角膜組織進行局部干預。應用明膠酶譜以及蛋白質(zhì)印跡法檢測角膜堿燒傷后3日及1周時不同濃度Zn2+離子溶液實驗亞組以及對照組角膜組織內(nèi)中-1，2及9的表達情況。
　　 結(jié)果:應用明膠酶譜方法觀察到堿燒傷后3日角膜組織內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達顯著的升高，呈現(xiàn)高水平表達，堿燒傷后1周其表達量顯著下降，而堿燒傷后1個月時角膜組織內(nèi)觀察不到基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達?；|(zhì)金屬蛋白酶-2與之相反，在堿燒傷后3日角膜組織內(nèi)僅呈現(xiàn)低水平表達，堿

3、燒傷后1周其角膜組織內(nèi)表達量顯著升高，呈現(xiàn)高水平表達，堿燒傷后1個月時其表達量再次降低，呈現(xiàn)中度水平表達。應用蛋白質(zhì)印跡法以及免疫組織化學方法觀察的堿燒傷后3日、1周及1個月組織內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶-9及2的表達變化情況與應用明膠酶譜方法觀察的情況相符，即:基質(zhì)金屬蛋白酶-9在堿燒傷后急性期高表達，且其高表達主要位于靠近角膜上皮層區(qū)域，而后表達量逐漸降低;基質(zhì)金屬蛋白酶-2在堿燒傷后急性期表達水平較低，而在堿燒傷后1周呈現(xiàn)高水平表達，不同于

4、基質(zhì)金屬蛋白酶-9，其高表達分布于角膜基質(zhì)內(nèi)，其后表達量再次降低，呈現(xiàn)中度水平表達。應用蛋白質(zhì)印跡法以及免疫組織化學方法觀察到堿燒傷后組織內(nèi)不同時期基質(zhì)金屬蛋白酶-1在角膜堿燒傷后組織內(nèi)的表達變化趨勢與基質(zhì)金屬蛋白酶-2相似，在堿燒傷后1周時表達水平最高，其后表達量下降，但其各時期表達量普遍較低。另一方面，研究通過明膠酶譜以及蛋白質(zhì)印跡法觀察到應用活化Zn2+離子干預的實驗組較對照組角膜組織在堿燒傷后3日對高水平表達的基質(zhì)金屬蛋白酶-9

5、以及堿燒傷后1周對呈現(xiàn)最高峰表達的基質(zhì)金屬蛋白酶-2及1的表達量均有明顯的抑制作用，其抑制作用呈現(xiàn)劑量正相關性。
　　 結(jié)論:基質(zhì)金屬蛋白酶-9在堿燒傷后主要通過降解角膜上皮基底膜打通組織屏障使更多免疫損傷介質(zhì)浸潤角膜基質(zhì)的方式，參與堿燒傷后角膜組織的病理性損傷過程。而基質(zhì)金屬蛋白酶-2則承擔了更為重要的實質(zhì)性組織損傷作用。研究亦從活體體內(nèi)觀察層面證實了活化Zn2+離子的局部應用對角膜堿燒傷后組織內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶的表達存在有效的