荷載IL-24基因的條件增殖型腺病毒聯(lián)合替莫唑胺治療黑色素瘤的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：研究荷載IL-24基因的條件增殖型腺病毒ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24聯(lián)合烷化劑替莫唑胺對黑色素瘤細胞增殖和凋亡的影響并探討其可能的協(xié)同促凋亡機制。
　　方法：腺病毒轉染HEK293細胞，擴增，測定滴度。將PBS、ZD55-EGFP、TMZ、ZD55-IL-24、KI67-ZD55、KI67-ZD55-IL-24、ZD55-EGFP聯(lián)合TMZ、ZD55-IL-24聯(lián)合TMZ、KI67-ZD55-IL-2

2、4聯(lián)合TMZ分別作用于黑色素瘤A375、M14細胞。CCK8法檢測細胞增殖;結晶紫法檢測細胞毒性;免疫細胞化學法檢測病毒Hexon蛋白及KI67基礎表達;Annexin V-FITC/PI及Hochest33258法檢測細胞凋亡情況;Western Blot法檢測腺病毒E1A、IL-24蛋白及MGMT，Bax、Bcl-2、Mcl-1、Procaspase-3、NF-κB、P53凋亡相關蛋白的表達情況。
　　結果：腺病毒ZD55-E

3、GFP、ZD55-IL-24、KI67-ZD55、KI67-ZD55-IL-24的滴度分別為7.1×109 ifu/ml，4.0×1010 ifu/ml、1.4×1010 ifu/ml、1.9×1010 ifu/ml; CCK8結果表明ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24聯(lián)合TMZ對黑色素瘤A375、M14細胞均有明顯的抑制增殖作用，中效原理分析提示兩者有協(xié)同作用;結晶紫實驗提示KI67-ZD55-IL-24的細胞毒性強

4、于ZD55-EGFP、ZD55-IL-24、KI67-ZD55;免疫細胞化學實驗提示KI67在3種黑色素瘤細胞株A375、M14及MV3中高表達，TMZ不影響病毒的復制;Annexin V-FITC/PI及Hochest33258結果表明ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24聯(lián)合TMZ作用于A375、M14細胞凋亡效應明顯增加;Western Blot結果表明ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24聯(lián)合TMZ作

5、用的A375、M14細胞能復制并表達IL-24，同時Bax的表達量增加，Mcl-1、Bcl-2的表達量均降低，Procaspase-3發(fā)生了明顯剪切;ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24可引起黑色素瘤細胞p53蛋白表達上調，MGMT蛋白表達下調。
　　結論：攜帶IL-24基因的條件增殖型腺病毒ZD55-IL-24、 KI67-ZD55-IL-24聯(lián)合化療藥物TMZ有協(xié)同抑制黑色素瘤細胞增殖、促進凋亡的作用。這種腫瘤

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