擬南芥抗菌核病突變體篩選及轉(zhuǎn)GO基因油菜表達(dá)研究.pdf

1、核盤菌[Sclerotiniasclerotiorum(Lib.)deBary]是一種廣譜性病原真菌，能危害75科450多種植物。在我國，S.sclerotiorum在大豆、油菜、向日葵和十字花科蔬菜上引起嚴(yán)重的菌核病，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。研究表明，草酸毒素在S.sclerotiorum致病過程中起關(guān)鍵作用。遺憾的是，人們至今尚未發(fā)現(xiàn)對S.sclerotiorum免疫的或有效的天然抗源。 本研究在建立了擬南芥抗菌核病篩選方法的基

2、礎(chǔ)上，篩選了51600株雌激素誘導(dǎo)激活型擬南芥T-DNA插入突變體，其中5000株采用菌絲體直接接種篩選法，篩選出抗感差異明顯的個體；其余46600株采用菌核病毒素草酸-病菌接種兩步篩選法，即先用2mmol/L草酸在MS培養(yǎng)基上篩選，存活的植株經(jīng)PCR驗證，陽性植株移栽培養(yǎng)15d后，再用菌絲體接種鑒定，篩選出2株對菌核病高抗的突變體，這2株為功能缺失型突變體。 另外，本試驗還采用轉(zhuǎn)葡萄糖氧化酶基因(GO)油菜和非轉(zhuǎn)基因油菜為材料

3、，利用半定量RT-PCR技術(shù)研究轉(zhuǎn)GO油菜和非轉(zhuǎn)基因油菜以及它們分別接種菌核病病原菌72h后的防御基因的差異表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)GO基因油菜株系中，PR-1比非轉(zhuǎn)基因油菜有明顯的上調(diào)表達(dá)；接種菌核病后，無論在非轉(zhuǎn)基因植株或轉(zhuǎn)基因植株中，防御相關(guān)基因PDF1.2、NPR1、PR-1的表達(dá)量都比非轉(zhuǎn)基因非接菌對照高，推測可能是外源GO轉(zhuǎn)入油菜后，首先為油菜提供了一定的防御潛能，當(dāng)接菌后使這些潛能釋放，激發(fā)其它防御的途徑。但這種機(jī)制有待進(jìn)一步