胡楊大片段基因轉(zhuǎn)化擬南芥的體系優(yōu)化和突變體篩選.pdf

1、本研究主要根據(jù)轉(zhuǎn)基因技術(shù)設(shè)計，以高大喬木胡楊和模式植物擬南芥為研究材料。通過花序侵染法，以農(nóng)桿菌為介導(dǎo)將胡楊大片段基因轉(zhuǎn)移到模式植物擬南芥中。研究中利用SilwetL-77作為侵染液，在不同濃度，不同時間下，將農(nóng)桿菌中攜帶的胡楊大片段基因轉(zhuǎn)入到擬南芥中，將獲得的轉(zhuǎn)化后的種子進(jìn)行抗性培養(yǎng)基的篩選，通過對可能的陽性轉(zhuǎn)化子進(jìn)行DNA的提取，驗證胡楊基因是否轉(zhuǎn)入到擬南芥中，將陽性轉(zhuǎn)化子進(jìn)行抗性培養(yǎng)基篩選，分子檢測、并篩選表型變化的突變體。為了更

2、進(jìn)一步研究胡楊基因組學(xué)，必須獲得可以穩(wěn)定遺傳且攜帶胡楊基因的純合子，還需要繼續(xù)培養(yǎng)陽性轉(zhuǎn)化子，進(jìn)行抗性篩選和傳代遺傳差異篩選。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴最佳農(nóng)桿菌菌種活化培養(yǎng)條件是YEP液體培養(yǎng)基，活化時間24h時。最佳轉(zhuǎn)化體系為300ulSilwetL-77/L侵染液侵染7min和500ulSilwetL-77/L侵染液侵染1min。⑵在轉(zhuǎn)化的862個克隆株系中，通過抗性培養(yǎng)基篩選并提取了約1500個轉(zhuǎn)化子的DNA，其中大部分