龍葵體外抗腫瘤活性部位的篩選及化學成分研究.pdf

1、龍葵（SolanumnigrumL.）為茄科茄屬植物龍葵的干燥全草，有清熱解毒、活血散瘀、利水消腫、止咳祛痰等功效。廣泛用于治療癌癥、炎癥、痢疾、感冒發(fā)熱、牙痛、功能性子宮出血、毒蛇咬傷、疔瘡、帶狀皰疹等多種疾病。
　　 本文主要進行了龍葵體外抗胃、肝癌活性部位篩選、活性部位化學成分分析、生物堿類單體成分體外抗胃、肝癌活性篩選及作用機制初探三個方面的研究，旨在通過體外藥理研究和化學成分研究探討龍葵體外抗腫瘤作用的物質基礎。

2、>　　 第一部分：龍葵體外抗胃、肝癌活性部位篩選。包括：
　　 1.本文選取體外培養(yǎng)的人肝癌細胞SMMC-7721、人肝癌細胞HepG2、人胃癌細胞MGC-803為模型，以半數(shù)抑制濃度（IC50）為指標，采用MTT法考察了龍葵水提液和醇提液對上述腫瘤細胞生長的抑制作用。結果表明，龍葵水提液和醇提液對三種腫瘤細胞均有顯著的增殖抑制作用，且呈明顯的濃度-效應依賴關系。應用倒置顯微鏡觀察龍葵水提液和醇提液對上述細胞形態(tài)的影響，結果表

3、明，龍葵水提液和醇提液可顯著改變?nèi)N癌細胞的細胞形態(tài)。
　　 2.采用經(jīng)典的植物化學分離路線，將龍葵的醇提物分成了五個萃取部位，分別是石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水溶性部位。采用MTT法、細胞形態(tài)觀察法對各萃取部位進行了體外抗胃、肝癌活性篩選，結果表明，龍葵石油醚部位和正丁醇部位對SMMC-7721、HepG2、MGC-803細胞均有明顯的增值抑制作用，呈劑量依賴關系，并且可使上述細胞的形態(tài)發(fā)生顯著變化。

4、r>　　 3.采用酸溶堿沉法自龍葵正丁醇部位分離得到了兩種生物堿類成分，采用大孔吸附樹脂法和丙酮沉淀法自龍葵正丁醇部位分離得到了兩種皂苷類成分，采用蒸餾水及堿溶液煎煮法、Sevag除蛋白法和雙氧水脫色法分離純化得到了龍葵水溶性多糖和堿溶性多糖。并采用MTT法、細胞形態(tài)觀察法對上述成分進行了體外抗胃、肝癌活性篩選，結果表明，龍葵生物堿、皂苷類成分能顯著抑制人肝癌SMMC-7721、HepG2細胞，人胃癌MGC-803細胞的增值，并明顯改

5、變上述三種細胞的細胞形態(tài)，是龍葵體外抗胃、肝癌的活性成分，而兩種多糖類成分對這三種癌細胞基本無活性。
　　 第二部分：龍葵活性部位化學成分分析。包括：
　　 1.采用水蒸氣蒸餾法自龍葵石油醚部位分離得到了揮發(fā)油成分，并采用GC-MS聯(lián)用技術對其進行了化學成分分析，結果鑒定出了49個組分，占總出峰面積的97.32％，分析結果表明石油醚部位揮發(fā)油的成分主要為酯類、烷烴類、脂肪酸類和酮類。
　　 2.利用化學鑒定法對龍

6、葵生物堿、皂苷類成分進行了定性分析，分別采用酸性染料法、香草醛-高氯酸比色法、苯酚-硫酸法對龍葵生物堿、皂苷、多糖類成分進行了含量測定。
　　 第三部分：龍葵生物堿類單體成分體外抗腫瘤活性篩選及作用機制初探。
　　 1.結合MTT法、細胞形態(tài)觀察法對龍葵中的主要生物堿類單體成分澳洲茄堿、澳洲茄邊堿、ε-龍葵堿進行了體外抗胃、肝癌活性篩選。MTT結果表明，澳洲茄邊堿對人肝癌SMMC-7721、人胃癌MGC-803細胞有顯著

7、的細胞毒作用。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)發(fā)現(xiàn)澳洲茄邊堿可使SMMC-7721、HepG2、MGC-803細胞發(fā)生多種形式的形態(tài)變化。
　　 2.采用流式細胞術研究了不同劑量的澳洲茄邊堿對人肝癌細胞SMMC-7721細胞周期分布的影響，分析結果顯示，澳洲茄邊堿可使SMMC-7721細胞阻滯于G2/M期，且呈明顯的濃度-效應依賴關系；當藥物作用細胞濃度為15μg/mL時，可誘導SMMC-7721細胞凋亡。說明澳洲茄邊堿可通過影響細胞周期