TSA協(xié)同MG-132誘導(dǎo)淋巴瘤和骨髓瘤細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的：觀察組蛋白去乙?；敢种苿㏕SA和蛋白酶體抑制劑MG-132單獨(dú)作用和聯(lián)合應(yīng)用對(duì)骨髓瘤及淋巴瘤細(xì)胞的增殖、周期以及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響,評(píng)估TSA和MG-132聯(lián)合應(yīng)用對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷的協(xié)同作用以及其中IRF4、c-Myc的表達(dá)變化。
　　 材料和方法采用組蛋白去乙酰化酶抑制劑TSA和蛋白酶體抑制劑MG-132作用淋巴瘤細(xì)胞系EL4、WEHI-231和多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系J558、SP2/0、P3NSI。分別應(yīng)用臺(tái)盼蘭法和Ann

2、exinV/PI雙、單染流式細(xì)胞儀觀察兩種藥物以不同濃度單獨(dú)和聯(lián)合作用后細(xì)胞增殖、周期和凋亡的變化。Bliss法計(jì)算TSA/MG-132對(duì)各細(xì)胞株的IC50值,基于Isobolographic method法的Calcuysn軟件計(jì)算協(xié)同作用指數(shù)CI(Combinationindices,CI),評(píng)價(jià)藥物協(xié)同作用。Westernblot檢測(cè)不同濃度藥物單獨(dú)和聯(lián)合作用后細(xì)胞內(nèi)周期和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的變化,包括細(xì)胞內(nèi)周期相關(guān)蛋白Cyclin

3、D1、p21和凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、caspase3。同時(shí),觀察了IRF4和c-Myc蛋白表達(dá)水平在藥物作用的淋巴瘤和骨髓瘤細(xì)胞中的差異。
　　 結(jié)果 TSA和MG-132均可在24小時(shí)后呈藥物濃度依賴(lài)的細(xì)胞增殖抑制。對(duì)于TSA,各細(xì)胞株IC50為3.5-8.0nM,MG-132為2.2-4.4uM。對(duì)5株細(xì)胞的協(xié)同作用指數(shù)CI值均小于1:P3NSI的CI值為0.004-0.293,J558的CI值為0.068-0.4

4、23,SP2/0D的CI值為0.029-0.319,WEHI的CI值為0.056-0.741,EL4的CI值為0.109-0.346。TSA/MG-132單獨(dú)作用各細(xì)胞株時(shí),細(xì)胞凋亡呈藥物濃度依賴(lài)性增高;聯(lián)合藥物作用于細(xì)胞株,細(xì)胞凋亡率增長(zhǎng),協(xié)同誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用明顯。細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-3激活,Bax、Bcl-2表達(dá)均減少。各細(xì)胞均阻滯于G0-G1期。藥物作用24后,G0/G1期細(xì)胞平均約增長(zhǎng)一倍:41％增加到75％。統(tǒng)計(jì)分

5、析顯示,藥物伍用對(duì)細(xì)胞周期阻滯沒(méi)有協(xié)同作用。CyclinD1表達(dá)水平下降,p21水平顯著上升。J558、SP2/0、P3NSI中,IRF4表達(dá)能被藥物抑制,聯(lián)合用藥能加強(qiáng)抑制作用;WEHI-231、EL4中,IRF4表達(dá)水平明顯低于前3株細(xì)胞,與藥物作用沒(méi)能顯示明顯的相關(guān)性。所有細(xì)胞株中,轉(zhuǎn)錄因子c-Myc表達(dá)水平隨藥物作用顯示不同程度的下調(diào),聯(lián)合用藥能加強(qiáng)抑制作用。
　　 結(jié)論本研究表明,TSA和MG-132單獨(dú)作用淋巴瘤細(xì)胞

6、株WEHI-231、EL4和骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞株J558、SP2/0、P3NSI,均能誘導(dǎo)藥物濃度依賴(lài)的細(xì)胞增殖抑制、周期阻滯和凋亡;聯(lián)合用藥時(shí)能發(fā)揮顯著協(xié)同作用,提高細(xì)胞增殖抑制率、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡率。但對(duì)周期阻滯協(xié)同作用不明顯。IRF4在J558、SP2/0、P3NSI中隨TSA/MG-132作用呈相關(guān)性下調(diào),c-Myc在5株細(xì)胞中均隨TSA/MG-132作用呈相關(guān)性下調(diào)。提示,IRF4、c-Myc可能涉及TSA和MG-132協(xié)同誘導(dǎo)腫瘤細(xì)