氨基肽酶抑制劑烏苯美司誘導(dǎo)人骨髓瘤細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的： 探討氨基肽酶N抑制劑(CD13抑制劑)烏苯美司在體外對人骨髓瘤細(xì)胞XG-1生長抑制、線粒體膜電位以及誘導(dǎo)人骨髓瘤細(xì)胞凋亡的作用及其作用機(jī)制。 方法： 常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)，取對數(shù)生長期人骨髓瘤XG-1細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，按1.5×103/孔的密度接種，培養(yǎng)24h細(xì)胞完全爬片后，烏本美司組加入500，1000μg/ml的烏本美司，空白對照組加入1640培養(yǎng)液。烏本美司作用24，48h后，用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)

2、的改變；用Rhodamine123分別標(biāo)記活細(xì)胞及經(jīng)藥物作用24h，48h后的細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測線粒體膜電位的變化：通過DNA片段原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測凋亡細(xì)胞；SABC細(xì)胞免疫法檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白，檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白半胱天冬酶3(caspase-3)及Bcl-2的表達(dá)，計(jì)算其分別的陽性表達(dá)并計(jì)算細(xì)胞凋亡率，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析細(xì)胞陽性率與細(xì)胞凋亡率之間的相關(guān)性；對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果： 細(xì)胞凋亡形態(tài)：經(jīng)烏

3、苯美司1000μg/ml作用48h后的入骨髓瘤XG-1細(xì)胞可見細(xì)胞體積縮小，核質(zhì)固縮，核膜核仁碎裂、溶解，胞質(zhì)濃縮，出現(xiàn)典型的凋亡小體。鏡下空白對照組人骨髓瘤XG-1細(xì)胞呈圓或橢圓形，并呈聚集狀態(tài)生長，分布均勻，細(xì)胞膜完整、胞質(zhì)透明清亮、細(xì)胞核一個(gè)或多個(gè)，形狀大而圓，細(xì)胞生長狀態(tài)良好；細(xì)胞免疫組化顯示入骨髓瘤XG-1細(xì)胞表面呈黃染，證實(shí)人骨髓瘤XG-1細(xì)胞表面有大量CD13存在；細(xì)胞凋亡及形態(tài)觀察：500，1000μg/ml烏苯美司作用

4、24h后細(xì)胞凋亡率分別為(23.57±5.41)％，(58.35±8.45)％；在24～48h過程中，凋亡的細(xì)胞逐漸壞死，空白對照組24，48h后細(xì)胞凋亡率均為1％。線粒體跨膜電位的變化：Rhodamine123染色結(jié)果顯示，1000μg/ml烏苯美司作用24h時(shí)線粒體膜電位熒光強(qiáng)度的峰值在100～1000，平均熒光強(qiáng)度明顯低于空白對照組(135.53±15.09，223.37±13.82，P<0.01)；作用48h時(shí)線粒體膜電位熒光強(qiáng)

5、度的峰值位于10～100，平均熒光強(qiáng)度顯著低于空白對照組(35.81±5.93，221.36±24.79，P<0.01)；凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)：500，1000μg/ml烏苯美司作用骨髓瘤細(xì)胞48h后，凋亡相關(guān)蛋白caspase-3表達(dá)明顯增高、Bcl-2表達(dá)則降低，并分別與凋亡率呈正相關(guān)與負(fù)相關(guān)；細(xì)胞DNA損傷：1000μg/ml烏苯美司作用24h后，TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡可見細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒，即為DNA受損標(biāo)志。 結(jié)論