人白細胞介素-24對胃癌細胞生長的影響及其抗腫瘤機制的研究.pdf

1、目的：純化人白細胞介素24的原核重組表達質粒pET-21a(+)-IL-24在大腸桿菌BL(DE3)中的表達產物rhIL-24，觀察重組表達蛋白rhIL-24對胃癌細胞株SGC-7901體外生長的影響，并初步探討其抗腫瘤作用可能的機制。 方法：利用IPTG誘導原核表達載體pET-21a)(+)IL-24在大腸桿菌中表達IL-24，經純化、復性后獲取重組蛋白rhIL-24。將rhIL-24作用于人胃癌細胞株SGC-790l，四氮唑

2、藍(MTT)比色還原法檢測rhIL-24對胃癌細胞體外生長的影響，流式細胞儀檢測凋亡峰，免疫熒光染色觀察細胞凋亡形態(tài)。逆轉錄-聚合酶聯(lián)反應(RT-PCR)、免疫印跡法(WesternBlotting)檢測rhIL-24對胃癌細胞株SGC-7901中促凋亡因子bax表達的影響，雞胚絨毛尿囊膜實驗觀察rhIL-24對血管生成的影響。 結果：獲得較高含量的重組蛋白rhIL-24。MTT法發(fā)現(xiàn)rhIL-24對體外培養(yǎng)的胃癌細胞株SGC-

3、7901有明顯的生長抑制作用，且呈時間、劑量依賴性，與陰性對照組相比差異有顯著性(P<0．05)。rhIL-24蛋白30μg／ml作用于SGC-7901細胞24h后，流式細胞儀(FCM)檢測結果顯示有明顯的凋亡峰出現(xiàn)，免疫熒光染色后顯示染色質固縮，細胞核呈致密濃染或呈碎塊狀致密濃染，而陰性對照組沒有凋亡峰出現(xiàn)，細胞的細胞核形態(tài)正常。RT-PCR、WesternBlotting檢測發(fā)現(xiàn)rhIL-24處理組(30μg／ml)胃癌細胞中促凋亡

4、因子baxmRNA、蛋白表達增高，雞胚絨毛尿囊膜實驗發(fā)現(xiàn)rhIL-24處理組(30μg／m1)雞胚絨毛尿囊膜二、三級血管數(shù)目明顯減少，三級血管的數(shù)目與生理鹽水組比較，差異有顯著性(P<0．001)。從形態(tài)上來看，生理鹽水組(NS)血管分支狀結構完整，各級血管清晰可見，rhIL-24組可見血管呈迂曲狀向外周生長，失去正常的血管樹枝狀分布，平陽霉素處理組的二、三級血管數(shù)明顯減少，可見雞胚絨毛尿囊膜水腫。 結論：本實驗成功純化IL-2