白細(xì)胞介素-2對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：提取胚胎大鼠(E14)大鼠腦室下區(qū)、海馬等部位的神經(jīng)干細(xì)胞體外條件下進(jìn)行原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng),并研究白細(xì)胞介素-2(jnterleukin-2,IL-2)對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響。
　　 方法：提取胚胎大鼠(E14)大鼠腦室下區(qū)、海馬等部位的神經(jīng)干細(xì)胞,體外條件下在完全培養(yǎng)基中進(jìn)行原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng),培養(yǎng)后行nestin染色,檢測(cè)其是否為神經(jīng)干細(xì)胞。將細(xì)胞分為四組,實(shí)驗(yàn)組內(nèi)分別添加一定量的IL-2使其濃度分別為50ng/ml、

2、100ng/ml和150ng/ml;對(duì)照組不添加IL-2.相同條件下培養(yǎng)3天后,加入BrdU,終濃度10μmol/L;繼續(xù)培養(yǎng)1天后行免疫細(xì)胞化學(xué)染色;顯微鏡下觀察,并計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞和陰性細(xì)胞數(shù),計(jì)算各組神經(jīng)干細(xì)胞的增殖率。
　　 結(jié)果：原代培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)目較少,培養(yǎng)第一天就可見大量細(xì)胞貼壁,少、數(shù)細(xì)胞伸出突起,從培養(yǎng)的第4-5天開始,貼壁的細(xì)胞破裂、死亡,而未貼壁的細(xì)胞則懸浮于培養(yǎng)基中,細(xì)胞數(shù)目增多,形成小的神經(jīng)球(Neur

3、osphere),神經(jīng)球逐漸增大。傳代細(xì)胞呈球形懸浮于培養(yǎng)瓶中,細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,未見明顯突起生長(zhǎng),傳代7天時(shí)神經(jīng)球已生長(zhǎng)成為數(shù)百個(gè)細(xì)胞的大克隆。神經(jīng)球nestin免疫細(xì)胞化學(xué)染色基本全部呈陽性,證實(shí)其為神經(jīng)干細(xì)胞。加入IL-2后神經(jīng)干細(xì)胞的增殖率顯著增加,其中IL-2濃度為150ng/ml時(shí),神經(jīng)干細(xì)胞的增殖率最大,明顯高于對(duì)照組;IL-2濃度為50ng/ml時(shí)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖率較IL-2濃度為150ng/ml時(shí)低,但仍顯著高于對(duì)照組;I