卷柏炒炭前后化學(xué)成分及其止血作用研究.pdf

1、　　目的：
　　建立卷柏不同炮制品中總黃酮及穗花杉雙黃酮的含量測定方法,比較炒炭對卷柏化學(xué)成分中總黃酮及穗花杉雙黃酮含量的影響；進(jìn)行卷柏不同炮制品止血藥理實(shí)驗(yàn),研究卷柏炒炭對其止血作用的影響；建立卷柏不同炮制品的指紋圖譜,探討卷柏炒炭后化學(xué)成分種類的變化；以探討卷柏炒炭炮制作用,為中醫(yī)臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　卷柏炒炭前后其總成分及指標(biāo)性成分含量變化：以乙醇濃度、提取溫度和提取次數(shù)為考察因素用

2、正交法優(yōu)選出卷柏中總黃酮的最佳提取工藝,并用紫外分光光度法測定卷柏不同炮制品中總黃酮含量變化；采用HPLC 色譜法,參照《中國藥典》關(guān)于卷柏含量測定的有關(guān)色譜條件將流動相由 0.1%磷酸-甲醇改為 0.1%甲酸-甲醇對卷柏不同炮制品中的穗花杉雙黃酮進(jìn)行含量測定。
　　卷柏炒炭后對止血作用的影響：以小鼠的出血時間和凝血時間的變化及大鼠凝血酶原時間( PT)和活化部分凝血活酶時間( APTT)、凝血因子中血漿纖維蛋白原( FIB)

3、的含量變化為指標(biāo)探討卷柏炒炭后對其止血作用的影響。
　　不同炮制品卷柏 HPLC 指紋圖譜研究：甲醇-0.1%甲酸為流動相,采用梯度洗脫,檢測波長為 330 nm,柱溫 30℃,流速 0.8mL2min-1對卷柏不同炮制品進(jìn)行 HPLC 分析測定,運(yùn)用 CHROMAP1.5 指紋圖譜處理軟件進(jìn)行相似度評價,建立卷柏不同炮制品的 HPLC 指紋圖譜,并對其圖譜進(jìn)行鏡像對比。
　　結(jié)果：
　　正交法優(yōu)選卷柏中總

4、黃酮最佳提取工藝：通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)提取時間,乙醇濃度和提取次數(shù)中,乙醇濃度有顯著影響。從直觀分析表確定卷柏總黃酮的最佳提取工藝是 A2B1C2,即 85℃水浴用 70%乙醇 30mL 水浴回流提取兩次,每次提取 1h。
　　卷柏不同炮制品中總黃酮含量測定：結(jié)果表明同一產(chǎn)地的卷柏不同炮制品中卷柏炭中總黃酮含量最低,卷柏炒炭后總黃酮含量下降。
　　卷柏不同炮制品中穗花杉雙黃酮含量測定：結(jié)果表明卷柏炒炭后穗花杉雙黃酮含量下降。

5、
　　卷柏炒炭后對小鼠出血時間影響：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明與生理鹽水組比較卷柏生品高劑量組能夠明顯延長小鼠出血時間( P<0.05),卷柏炭高低劑量組均能顯著縮短小鼠出血時間( P<0.01)；卷柏炭高低劑量組分別于同劑量的卷柏生品進(jìn)行比較均能顯著縮短小鼠出血時間( P<0.01)。
　　卷柏炒炭后對小鼠的凝血時間影響：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明與生理鹽水組比較卷柏生品高劑量組能夠明顯延長小鼠凝血時間( P<0.05)卷柏炭低劑量組能夠明顯

6、縮短小鼠凝血時間( P<0.05)卷柏炭高劑量組能夠顯著縮短小鼠凝血時間( P<0.01)；與同劑量的卷柏生品比較卷柏炭低劑量組能夠明顯縮短小鼠凝血時間( P<0.05)卷柏炭高劑量組能夠顯著縮短小鼠凝血時間( P<0.01)。
　　卷柏炒炭后對大鼠 PT, APTT 及 FIB 的影響：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明與生理鹽水組比價卷柏生品低劑量組能夠明顯延長 PT 和 APTT( P<0.05),能夠使 FIB 明顯增加( P<0.05),

7、卷柏生品高劑量組能夠顯著延長 PT 和 APTT ( P<0.01),能夠使 FIB 顯著增加( P<0.01)；卷柏炭低劑量組能夠明顯縮短 PT 和 APTT( P<0.05),能夠使 FIB 明顯減少( P<0.05)卷柏炭高劑量組能夠顯著縮短 PT 和 APTT( P<0.01),能夠使 FIB 顯著減少( P<0.01)。與同劑量卷柏生品比較卷柏炭低劑量組能夠明顯縮短 PT 和 APTT ( P<0.05),能夠使 FIB 明顯

8、減少( P<0.05)炭高劑量組能夠顯著縮短 PT和 APTT( P<0.01),能夠使 FIB 顯著減少( P<0.01)。卷柏不同炮制品的指紋圖譜進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)卷柏炒炭后有 3 種新的未知成分產(chǎn)生。
　　結(jié)論：
　　通過對卷柏不同炮制品中總黃酮含量及其指標(biāo)性成分穗花杉雙黃酮含量進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)卷柏炒炭后總黃酮含量上升而穗花杉雙黃酮含量明顯下降。而且卷柏炭能夠明顯縮短小鼠出血時間和凝血時間；能夠明顯使大鼠 PT 和 A