CLC-3基因在宮頸癌中的表達及臨床意義.pdf

1、目的：宮頸癌是發(fā)展中國家婦女最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率占女性生殖器官惡性腫瘤的首位，是危害婦女健康及生命的重要因素，大量研究證實宮頸癌與人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染有關(guān)，然而并非感染HPV就注定發(fā)展為宮頸癌，提示有其他因素共同參與宮頸癌的惡性轉(zhuǎn)化過程。氯離子通道是細胞的主要陰離子通道，在細胞膜電位，調(diào)節(jié)細胞跨上皮轉(zhuǎn)運，維持胞內(nèi)pH值及在細胞容積調(diào)節(jié)等方面氯通道都發(fā)揮重要的作用，CLC-3屬電壓門控性氯離子通道，但其又有容積調(diào)控氯通道的部

2、分特性，近年研究發(fā)現(xiàn)：CLC-3在細胞周期的調(diào)控，細胞凋亡，細胞黏附，細胞動力學(xué)方面都有一定的作用。在人宮頸癌細胞系中高增殖細胞的CLC-3氯通道基因表達明顯大于靜止期細胞。CLC-3在宮頸癌組織中的表達情況尚不清楚，故本研究的目的是利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法探討電壓門控性氯離子通道(CLC-3)在子宮頸癌組織中的表達及臨床意義。 材料和方法 1、標(biāo)本的采集 取自中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦科20

3、05年6月至2007年9月宮頸活檢和手術(shù)切除之標(biāo)本，宮頸癌70例，其中有10例宮頸癌組織為治療前和放化療兩周時先后取材，正常宮頸組織標(biāo)本10例。試驗標(biāo)本均經(jīng)組織病理學(xué)診斷證實。宮頸癌患者的臨床病理資料包括：①年齡：以40歲為界分為兩組，<40歲組38例及≥40歲組32例；②采用國際婦科聯(lián)盟(FIGO)分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ-Ⅱ期41例，Ⅲ-Ⅳ期29例；③根據(jù)組織學(xué)分類：G1：高分化14例，G2：中分化40例，G3：低分化(或未分化)16例；④治療

4、前后：同一患者治療前及放化療兩周時配對，共10對。 2、方法 采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測CLC-3mRNA在60例宮頸癌組織，10例經(jīng)放化療前后的宮頸癌組織，10例正常宮頸組織中的表達。 3、結(jié)果判定 取6μlRT-PCR反應(yīng)產(chǎn)物與4μl6×loading buffer混勻后取7μl在2％的瓊脂糖凝膠上電泳，同時選DL-2000為Marker，電腦成像灰度值測定。通過比較各樣本CLC

5、-3及內(nèi)參照β-actin的光密度值，將結(jié)果進行半定量分析(即將組織樣本中的CLC-3mRNA的PCR產(chǎn)物與細胞中恒定表達的β-actin mRNA的PCR產(chǎn)物的灰度值進行比較)，最終得出CLC-3mRNA在宮頸癌及宮頸正常組織中的相對含量。 4、統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)資料均采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計處理，各組計量資料的結(jié)果采用t檢驗和方差分析，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1、正常宮頸組織和宮

6、頸癌中CLC-3mRNA的表達 CLC-3mRNA在正常宮頸組織中的表達的灰度值比值為0.6912與宮頸癌組織中的2.3937相比，有顯著性差異(P=0.001)。 2、各種臨床病理因素間宮頸癌CLC-3mRNA的表達 CLC-3mRNA在G1期中表達為1.3187、G2期為1.5718，與G3期的4.5899相比，有顯著性差異(P=0.002)。CLC-3mRNA在G1、G2期中的表達無顯著性差異，CLC-3m

7、RNA在宮頸癌Ⅰ-Ⅱ期中表達為1.0842，在宮頸癌Ⅲ-Ⅳ期表達為3.5688，兩者有顯著性差異(P=0.001)。在年齡≥40歲組CLC-3mRNA的表達為1.3583與年齡＜40歲組的1.2421比較，二者之間無顯著性差異(P=0.665)。 3、CLC-3mRNA在宮頸癌放化療前、后組織中的表達 CLC-3mRNA在放化療前的宮頸癌組織中表達為1.5198，放化療兩周時CLC-3mRNA表達為0.2237相比，二者