不同方法培養(yǎng)Vero細胞和甲型流感病毒(H3N2)的研究.pdf

1、流行性感冒(簡稱流感)是由流感病毒(influenza virus)引起的急性呼吸道傳染病。流感病毒是世界上研究最早的病毒之一，是能在短時間內引起世界大流行的病毒，而且可以在各個年齡段的人群中引起發(fā)病。在20世紀，人類發(fā)生了四次全球性的大流行。目前的流感疫苗均以雞胚為基質生產(chǎn)，國內外使用雞胚培養(yǎng)疫苗已經(jīng)有50年歷史。但雞胚流感疫苗不易規(guī)?；坏┌l(fā)生流感大流行，難以在短期內提供足量疫苗。Vero細胞是WHO積極推薦用于疫苗生產(chǎn)的細胞基質

2、。然而流感病毒要在Vero細胞上生長，必須添加胰酶才能保證有效繁殖，而培養(yǎng)液中的牛血清會使胰酶活性喪失，這就要求Vero細胞最好在低血清甚至無血清條件下進行培養(yǎng)。本研究首先以不同低血清濃度培養(yǎng)Vero細胞，并在此基礎上接種流感病毒株，優(yōu)化接種條件。然后對Vero細胞進行無血清培養(yǎng)，并用100ml攪拌瓶進行微載體培養(yǎng)并接種流感病毒H3N2型Vero細胞適應株。 一、低血清培養(yǎng)Vero細胞和流感病毒的研究 本實驗采用SLM—

3、199為基礎培養(yǎng)基，添加不同濃度的血清培養(yǎng)Vero細胞，觀察細胞連續(xù)傳代的生長狀態(tài)，在1.0％血清濃度下培養(yǎng)的Vero細胞接種流感病毒血凝效價較高；固定血清濃度后優(yōu)化接種流感病毒條件，采用不同pH值、不同TPCK—胰酶濃度和不同接種病毒量，測定其在不同病毒培養(yǎng)條件下的血凝效價，得到最佳培養(yǎng)流感病毒條件為pH值在7.2～7.5之間、TPCK—胰酶含量為1.0μg/ml、MOI為1.0、病毒繁殖時間72h。 二、無血清培養(yǎng)Vero細