不同環(huán)境下三種治法對(duì)甲3亞型流感病毒（H3N2）感染小鼠治療干預(yù)作用研究.pdf

1、流感病毒是嚴(yán)重威脅人類健康的一種病原體，它能導(dǎo)致流感流行甚至世界大流行，流感在各個(gè)年齡階段的人群中都可能爆發(fā)而引起急性發(fā)熱性呼吸道疾病。1997年香港第一起人類禽流感事件發(fā)生以來，不斷有人感染高致病性禽流感病毒H5N1死亡的報(bào)道，流感病毒再次向人類展示了它的巨大“威力”。 甲3亞型流感病毒(H3N2)屬于甲型流感病毒的一個(gè)亞型，1968年最早出現(xiàn)于香港，后傳播到日本、美國(guó)等地，引發(fā)了一場(chǎng)流感世界大流行。此后，雖未再次引起世界大流

2、行，但散發(fā)流行至今。近年來，世界范圍的流感流行病學(xué)監(jiān)控和調(diào)查分析顯示，該亞型流感病毒在全球是流行優(yōu)勢(shì)株，國(guó)內(nèi)和廣東省的調(diào)查也顯示相同的趨勢(shì)。 本文從甲3亞型流感病毒的現(xiàn)代研究、機(jī)體抗流感病毒免疫研究、中醫(yī)藥抗流感病毒實(shí)驗(yàn)研究、中醫(yī)對(duì)流感的認(rèn)識(shí)及外感病理論研究等方面進(jìn)行了綜述。 無論是甲3亞型流感病毒的國(guó)際流行株，還是國(guó)內(nèi)及廣東省的流行株，均發(fā)生了抗原漂移。由于監(jiān)測(cè)毒株的抗原性變化對(duì)預(yù)防流感流行及疫苗的研制有重要意義，因此

3、目前國(guó)外和國(guó)內(nèi)相關(guān)機(jī)構(gòu)對(duì)甲3亞型毒株的抗原性變化進(jìn)行了大量深入的研究，努力揭示了毒株抗原漂移的分子生物學(xué)機(jī)制。而在該亞型流感的治療上，除了使用一些抗甲型流感的藥物外，沒有新的研究進(jìn)展。同時(shí)，甲3亞型毒株對(duì)現(xiàn)有抗流感藥物產(chǎn)生耐藥性的病例報(bào)道在不斷增多?？沽鞲胁《疽呙绫徽J(rèn)為是預(yù)防流感最有效的方法，但由于流感病毒不斷發(fā)生抗原漂移，疫苗的研制進(jìn)程遠(yuǎn)滯后于毒株的變異速度，給甲亞型流感的預(yù)防帶來困難。 流感在中醫(yī)學(xué)中屬外感病范疇，分別散見于

4、溫病中的“風(fēng)溫”、“春溫”，以及傷寒的“太陽病”、“陽明病”、“少陽病”各型中。中醫(yī)外感病理論有著悠久的歷史和豐富的內(nèi)容，其中包含了很多治療流感行之有效的經(jīng)典治法和方藥。目前，中醫(yī)藥抗流感病毒實(shí)驗(yàn)研究正在積極地展開，包括了對(duì)單味藥和對(duì)中藥復(fù)方進(jìn)行的體內(nèi)和體外抗病毒研究。已經(jīng)從對(duì)有效藥物的篩選發(fā)展到對(duì)有效成分、有效部位的篩選；從單純考察藥物對(duì)流感病毒的直接抑制作用到考察藥物對(duì)機(jī)體抗病毒免疫功能的影響。這些研究都取得了一定的成果，對(duì)指導(dǎo)中醫(yī)

5、臨床防治流感起到了積極的作用。 但現(xiàn)有的中醫(yī)藥抗流感病毒實(shí)驗(yàn)較多使用的是甲1亞型流感病毒，而對(duì)甲3亞型的研究相對(duì)較少。同時(shí)，現(xiàn)有中醫(yī)藥抗流感病毒實(shí)驗(yàn)缺乏具有中醫(yī)特點(diǎn)的、能對(duì)中醫(yī)藥綜合作用進(jìn)行評(píng)價(jià)的系統(tǒng)研究方法，使得中醫(yī)藥治療外感病辨證論治的優(yōu)勢(shì)得不到充分展示，不能更好地全面地說明中醫(yī)藥理論在治療流感上的獨(dú)特作用。 本文實(shí)驗(yàn)研究部分是在對(duì)甲3亞型流感病毒A/昆科/1/71(H3N2)任株的血凝素(HA)基因進(jìn)行核苷酸序列測(cè)

6、定，對(duì)毒株進(jìn)行基因水平鑒定的基礎(chǔ)上，從體外細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩方面著手，把辛涼解表、辛溫解表及祛濕解表等三種不同治法和常溫環(huán)境、熱環(huán)境和寒環(huán)境三種不同環(huán)境相結(jié)合來考查中藥復(fù)方的抗流感病毒作用和免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。體外實(shí)驗(yàn)觀察三種治法代表方銀翹散、桂枝麻黃各半湯和新加香薷飲在細(xì)胞培養(yǎng)中對(duì)甲3亞型流感病毒的抑制作用。 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)在建立甲3亞型流感病毒感染小鼠模型的基礎(chǔ)上，分別在三種環(huán)境條件下運(yùn)用三種治法的代表方進(jìn)行小鼠體內(nèi)抗流感病毒

7、實(shí)驗(yàn)，測(cè)定了相關(guān)藥效學(xué)指標(biāo)：肺指數(shù)和肺臟病理改變程度；相關(guān)免疫學(xué)指標(biāo)：血清白細(xì)胞介素2(IL-2)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)以及外周血中T淋巴細(xì)胞亞群(CD3<'+>％，CD4<'+>％，CD8<'+>％)。 測(cè)序結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)所測(cè)得甲3亞型流感病毒A/昆科/1/71(H3N2)任株HA基因序列和Influenza A virus(A/Hong Kong/6/72(H3N2))最大同源性經(jīng)BLAST服務(wù)器分析為99％。本次

8、測(cè)序是該毒株自臨床分離后首次進(jìn)行的HA基因鑒定，第一次在基因水平上鑒定了該毒株的型別。 體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，三種治法的代表方在體外細(xì)胞培養(yǎng)中對(duì)甲3亞型流感病毒均無明顯的抑制作用。 體內(nèi)抗流感病毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：三種治法對(duì)小鼠甲3亞型流感肺炎均有一定的治療干預(yù)作用，表現(xiàn)為減輕肺實(shí)變，降低肺指數(shù)、改善病毒性肺炎的病變程度等，但三種治法在不同環(huán)境下的作用有差異：辛涼解表法在常溫和熱環(huán)境下顯示了較好的體內(nèi)抗流感病毒作用，但在寒環(huán)境下

9、無效。辛溫解表和祛濕解表法在三種不同環(huán)境下的作用都比較穩(wěn)定，均有較好的體內(nèi)抗流感病毒作用。 相關(guān)免疫指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果：三種不同治法對(duì)甲3亞型流感病毒感染小鼠的免疫功能均有一定的調(diào)節(jié)作用，可以通過提高感染小鼠外周血中成熟T淋巴細(xì)胞和輔助性T細(xì)胞的百分比(CD3<'+>(％)、CD4<'+>(％))進(jìn)而提高感染小鼠細(xì)胞免疫功能。也可以通過提高感染小鼠血清IL-2，降低血清TNF-α，調(diào)節(jié)感染小鼠體內(nèi)保護(hù)性細(xì)胞因子IL-2和促炎細(xì)胞因子T