食管癌放療中血清蛋白酶體及VCP水平的動態(tài)變化及其臨床意義.pdf

1、泛素—蛋白酶體途徑（ubiquitin—proteasome pathway，UPP）是真核細(xì)胞中ATP依賴的非溶酶體蛋白降解途徑，廣泛參與細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核內(nèi)多種蛋白質(zhì)的降解過程，尤其是一些短壽命的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白、癌基因、抑癌基因產(chǎn)物及一些異常折疊的蛋白等，并具有高效性及高選擇性，在蛋白質(zhì)的質(zhì)量控制中發(fā)揮重要作用。VCP（valosin—containing protein）是一種Ⅱ型AAA—ATP酶，細(xì)胞內(nèi)含量豐富且結(jié)構(gòu)保守，可作為分

2、子伴侶參與泛素—蛋白酶體途徑。有研究提出泛素—蛋白酶體途徑在惡性腫瘤的發(fā)生中起重要作用。本文通過檢測食管癌患者血清中VCP水平及蛋白酶體水平，探討泛素—蛋白酶體途徑在調(diào)解食管癌的發(fā)生、發(fā)展中的作用，為早期發(fā)現(xiàn)腫瘤及治療提供重要的依據(jù)。 研究目的： 應(yīng)用VCP抗原免疫白兔，制備VCP多克隆抗體，并應(yīng)用ELIsA法及WeStern印跡法檢測食管癌患者血清中VCP水平及蛋白酶體水平，探討蛋白酶體及VCP在食管癌中的變化情況及臨

3、床意義，并分析兩者間的相關(guān)性，以期為以后腫瘤的診斷、治療及療效觀察提供幫助。 研究方法： 1、血樣采集共有37例食管癌病人被納入實(shí)驗(yàn)，均為2008年7月至2009年2月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院放療科住院治療的初治食管癌患者，排除合并有其他已證實(shí)會造成蛋白酶體水平異常的疾病的患者，且所有患者均接受完成根治性放療，放療前后采集空腹靜脈血作試驗(yàn)用。30例正常人被納入對照組，所有人均排除腫瘤及自身免疫性疾病，亦采取空腹靜脈血作對照。

4、 2、VCP抗體的制備及檢測利用常規(guī)免疫方案用VCP抗原免疫新西蘭大白兔，制備VCP抗體，利用ELISA技術(shù)檢測其效價(jià)。 3、血清中VCP水平及蛋白酶體水平測定用制備好的VCP抗體作為一抗，利用ELISA方法檢測食管癌患者血清中VCP水平，并用兔20S蛋白酶體α5多亞基抗體作為一抗檢測食管癌患者治療前后血清中蛋白酶體水平及正常人血清中蛋白酶體水平。并應(yīng)用western bloting法鑒定血清中蛋白酶體水平。 4、

5、統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用簡明統(tǒng)計(jì)分析10．34軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用t檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)、方差分析、直線回歸檢驗(yàn)等進(jìn)行顯著性差異檢驗(yàn)。以P<0．05表示有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 研究結(jié)果： 1、37例食管癌患者中男29例，女8例，男女比例3．6/1，年齡36—84歲，平均年齡64歲，37例患者均經(jīng)電子胃鏡檢查，取活檢病理確診為食管鱗狀細(xì)胞癌，所有患者治療前均有CT檢查結(jié)果，按CT結(jié)果采用Moss等食管癌分期法對食管癌分期，其中Ⅰ期

6、5例，Ⅱ期13例，Ⅲ期14例，Ⅳ期5例。 2、用VCP抗原常規(guī)免疫大白兔后，ELISA技術(shù)檢測大白兔血清中VCP抗體效價(jià)）1：8000 3、ELISA法測定食管癌患者及正常人血清中VCP水平及蛋白酶體水平后，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法檢驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)食管癌患者血清中蛋白酶體水平及VCP水平與正常人均有顯著性差異（結(jié)果分別為P=0．0015及P=0．0026）；應(yīng)用直線相關(guān)回歸分析，發(fā)現(xiàn)食管癌患者血清中蛋白酶體水平與VCP水平存在正相關(guān)性

7、（P=0．0226）；Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ期患者之間血清中蛋白酶體水平無顯著性差異（P>0．05），但均與Ⅳ期患者血清中蛋白酶體水平存在顯著性差異（P<0．05）；食管癌患者經(jīng)根治性放療后，血清中蛋白酶體水平發(fā)生顯著性下降（P=0．0125）；治療后近期療效評價(jià)，有效組下降較無效組明顯（P=0．0135）。 4、WeStern印跡法鑒定蛋白酶體水平發(fā)現(xiàn)食管癌患者特異的蛋白條帶灰度較正常人明顯增強(qiáng)。 研究結(jié)論： 1、利用

8、VCP抗原免疫新西蘭大白兔，可制備出高效價(jià)的VCP多克隆抗體。 2、食管癌患者血清中蛋白酶體的水平較正常人明顯增高，且病期越晚，蛋白酶體的水平越高，給予放療后其水平降低，且降低程度與近期療效有關(guān)，提示食管癌與泛素—蛋白酶體活性的增強(qiáng)有關(guān)，且血清蛋白酶體水平與腫瘤負(fù)荷大小呈正相關(guān)，可作為食管癌診斷及監(jiān)測腫瘤病情變化的參照指標(biāo)。 3、食管癌患者血清中蛋白酶體的水平與1VCP水平呈正相關(guān)，提示VCP參與泛素—蛋白酶體途徑的作用