石杉堿甲聚合物溫敏凝膠的研究.pdf

1、阿爾茨海默癥(Alzheimer'sdisease，AD)是一種多病因參與的神經(jīng)退行性疾病，臨床表現(xiàn)為記憶功能不斷惡化，語言功能退化，判斷力降低，并有各種神經(jīng)精神癥狀和行為障礙;通過對其發(fā)病機理研究發(fā)現(xiàn)，AD患者腦部乙酰膽堿明顯缺乏，乙酰膽堿酯酶和膽堿乙酰轉移酶活性降低，從而認知功能減退。石杉堿甲(Huperzine-A，HA)，是一種高效的、可逆的膽堿酯酶抑制劑，可順利穿透血-腦屏障，并顯示出較高的乙酰膽堿酯酶特異性。HA已被證實是A

2、D患者認知功能障礙的最有前途的治療藥物之一。
　　 目前，上市的HA制劑只有片劑和膠囊劑，需一天給藥2-3次，AD患者的記憶力下降，長期的治療較難堅持;且藥物濃度高或低于治療劑量時，易產(chǎn)生不良反應;且HA的體內(nèi)半衰期較短，藥理活性較強，僅需微量即可達到治療效果;因此，HA最好的給藥劑型是長時間持續(xù)釋放劑型，避免了日常管理，提高了病人的依從性和治療的安全性。
　　 本課題采用生物相容性好、生物可降解的磷脂(Phosphol

3、ipids，SP)、聚乙二醇(poly(ethyleneglycol)，PEG)-聚酯(polyester，PET)類三嵌段共聚物作為載體材料，將HA制備成磷脂復合物，再將磷脂復合物分散在具備溫度敏感特性的PLGA-PEG-PLGA中制備成凝膠，用于皮下注射給藥;既增加了病人的順應性，又可以達到長效緩釋的效果。本課題為HA的進一步開發(fā)應用提供了一定的研究基礎，具有一定的經(jīng)濟價值和社會意義。本文主要研究內(nèi)容包括:
　　 1.石杉堿

4、甲磷脂復合物的研究
　　 建立了HA的含量測定方法;采用溶劑揮發(fā)法制備石杉堿甲磷脂復合物(HA-SPC);采用紅外光譜、紫外光譜、X-射線衍射、差示掃描量熱等技術證明藥物-磷脂復合物的形成;通過負染色透射電鏡觀察復合物的外觀形態(tài);采用激光散射粒度儀測定其粒徑大小、分布和Zeta電勢;考察HA形成復合物后的溶解度變化;采用動態(tài)膜透析法，以HA溶液為對照，研究了HA-SPC體外釋放百分率。
　　 研究結果表明，采用紫外分光光

5、度法測定復合物中HA的含量，專屬性強、重現(xiàn)性及靈敏性好，操作簡便;對HA-SPC的鑒別結果表明HA分子與SP分子之間存在相互作用;在三種不同介質(zhì)中，HA-SPC比HA的溶解度分別提高了1.56，1.53和2.51倍;透射電鏡下觀察復合物呈類球形膠囊，具有良好的分散性，顆粒之間無粘連;測得HA-SPC平均粒徑約為120.0nm，分散系數(shù)為0.189;在生理pH條件下，Zeta電勢為-35.5mV;與HA溶液相比，HA-SPC延緩了藥物的體

6、外釋放，在釋放初期物質(zhì)的量比為1∶1的HA-SPC比物質(zhì)的量比為2∶1和1∶2的HA-SPC的溶出速度慢，說明物質(zhì)的量比為1∶1的HA-SPC的結合率高，游離的藥物量較少，因此，選用物質(zhì)的量比為1∶1的HA-SPC進行以下研究。
　　 2.石杉堿甲溫敏型凝膠制劑的研究
　　 本章采用試管倒置法作為測定膠凝溫度的方法，以是否能夠獲得適宜膠凝溫度及在室溫條件下凝膠的通針性為依據(jù)來篩選PLGA-PEG-PLGA凝膠的濃度，采用

7、分散法制備HA凝膠及HA-SPC凝膠;通過無膜擴散法對HA凝膠和HA-SPC凝膠進行體外釋放試驗，考察其體外釋藥特性;進行藥動學模型擬合，分析其釋藥機理。
　　 研究結果表明，制備HA凝膠及HA-SPC凝膠的PLGA-PEG-PLGA的最優(yōu)濃度為25％(w/w);制備的HA凝膠和HA-SPC凝膠的膠凝溫度分別為32.5±0.2℃和29.0±0.2℃;在25℃以下具有良好的通針性;載有磷脂復合物的凝膠明顯改善了HA在釋放初期存在的

8、突釋問題，HA-SPC凝膠在12天釋放了70％左右，緩釋效果相對于HA有了明顯的改善;體外釋放初期符合Higuchi方程，在后期符合Ritger-Peppas方程，即HA在凝膠中的釋放初期以擴散為主，后期是擴散和溶蝕相結合。
　　 3.石杉堿甲凝膠制劑動物體內(nèi)釋藥動力學的研究
　　 采用高效液相-質(zhì)譜法測定家兔血漿中HA的濃度，建立血藥濃度檢測方法并進行方法學考察;以新西蘭家兔為模型動物，以HA生理鹽水溶液為對照制劑，對

9、制備的HA凝膠和HA-SPC凝膠制劑進行體內(nèi)藥動學研究。
　　 方法學考察結果表明，所選質(zhì)譜條件及藥物提取方法的專屬性好，靈敏度高，滿足生物樣品測定要求;體內(nèi)釋放結果表明，HA凝膠和HA-SPC凝膠中的體內(nèi)釋放時間可以達到12天之久，具有明顯的緩釋效果;另外，HA-SPC凝膠有效地降低了HA凝膠的突釋行為;將血藥濃度測定結果用DAS2.1.1軟件進行分析，算出主要藥物動力學參數(shù):HA溶液、HA凝膠和HA-SPC凝膠的Cmax分別

10、為7.15±1.90，4.36±1.12，2.54±0.770ng·mL-1，體內(nèi)平均滯留時間MRT分別為2.76±0.153，89.84±2.03，129±43.1h，清除率CL分別為8.52±2.13，7.23±1.18，6.80±1.70L·h-1。以上結果表明，制備的HA凝膠和HA-SPC凝膠家兔皮下注射給藥后，均達到較好的緩釋效果，在體內(nèi)釋放初期，HA-SPC凝膠維持比HA凝膠略低的血藥濃度，降低了藥物的突釋，這有利于降低藥物