五倍子水提取物拮抗內(nèi)毒素對人牙髓細(xì)胞毒性作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、牙髓炎是以G-厭氧菌感染為主的感染性疾病，是口腔科常見疾病之一。G-菌細(xì)胞壁外膜中的脂多糖是主要的毒力因子，LPS可引起牙髓組織明顯的炎癥反應(yīng)，且對牙髓組織細(xì)胞有明顯的毒性作用。HDPCs是牙髓組織中的主體細(xì)胞，HDPCs不僅具有合成牙髓有機(jī)質(zhì)的能力，而且必要時(shí)還能分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞保護(hù)牙髓。LPS可以通過2 條途徑作用于HDPCs，直接作用：主要表現(xiàn)為抑制HDPCs增殖和分化，損傷HDPCs超微結(jié)構(gòu)，刺激HDPCs產(chǎn)生細(xì)胞因子；間接作

2、用：LPS刺激免疫細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，再作用于HDPCs。因此，采取有效措施拮抗LPS對HDPCs的毒性作用意義重大。中藥五倍子具有抗菌、抗病毒、抗氧化和收斂等作用，能降解LPS，阻斷其生物學(xué)效應(yīng)。本研究通過細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、MTT實(shí)驗(yàn)、放射免疫檢測法及透射電鏡觀察等方法觀察五倍子水提取物對LPS抑制HDPCs增殖和HDPCs的ALP活性，LPS損傷HDPCs超微結(jié)構(gòu)，LPS誘導(dǎo)HDPCs分泌IL-6 的影響，探討五倍子水提取物拮抗LPS對H

3、DPCs的毒性作用。 實(shí)驗(yàn)一：五倍子水提取物對LPS 抑制HDPCs 增殖的影響 本實(shí)驗(yàn)采用MTT 法檢測五倍子水提取物對LPS 抑制HDPCs 增殖的影響。結(jié)果顯示，培養(yǎng)液中加入濃度為50μg/ml、100μg/ml 的LPS 時(shí)，HDPCs 的增殖活性受到明顯抑制，加入低濃度（1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml）五倍子水提取物能明顯拮抗100μg/ml 的LPS 對HDPCs 增殖的抑制作用，2.5μ

4、g/ml 五倍子水提取物拮抗100μg/ml 的LPS 對HDPCs 增殖抑制作用第3天開始明顯增加，并呈時(shí)間依賴性。由此說明，低濃度五倍子水提取物能夠拮抗LPS 對HDPCs 增殖的抑制作用。 實(shí)驗(yàn)二：五倍子水提取物對LPS 損傷HDPCs 超微結(jié)構(gòu)影響 本實(shí)驗(yàn)采用透射電鏡觀察五倍子水提取物對LPS 損傷HDPC 超微結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果顯示100μg/ml 內(nèi)毒素對牙髓細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)有不同程度的損傷，加入5μg/ml 五倍

5、子水提取物后，牙髓細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷明顯減輕，細(xì)胞器結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常。由此說明，低濃度五倍子水提取物能夠抑制內(nèi)毒素對HDPCs超微結(jié)構(gòu)的損傷作用。 實(shí)驗(yàn)三：五倍子水提取物對LPS 抑制HDPCs 的ALP 活性影響 本實(shí)驗(yàn)采用酶動(dòng)力學(xué)法檢測五倍子水提取物對LPS抑制HDPCs 的ALP 活性的影響。結(jié)果顯示，低濃度（2.5、5、10μg/ml）五倍子水提取物能明顯拮抗100μg/ml 內(nèi)毒素對細(xì)胞ALP 活性的抑制作用，5

6、μg/ml 五倍子水提取物拮抗100μg/ml 內(nèi)毒素對細(xì)胞ALP 活性的抑制作用第2 天開始明顯增加，并呈時(shí)間依賴性。由此說明，低濃度五倍子水提取物能夠拮抗內(nèi)毒素對HDPCs的ALP 活性的抑制作用。 實(shí)驗(yàn)四：五倍子水提取物對LPS 誘導(dǎo)HDPCs 產(chǎn)生IL-6 影響 本實(shí)驗(yàn)采用放免法檢測五倍子水提取物對LPS 誘導(dǎo)HDPCs 產(chǎn)生IL-6 的影響。結(jié)果顯示2.5、5、10、20μg/ml 五倍子水提取物能明顯抑制25