大蒜水溶性提取物中拮抗內(nèi)毒素組分的制備及其活性研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)室在前期研究中通過溶液萃取、硅膠層析、離子交換層析、HPLC分離等技術(shù)從大蒜提取液中分離出能與內(nèi)毒素(LPS)及其活性中心LipidA特異性結(jié)合的拮抗內(nèi)毒素活性的大蒜水溶性A組分(ASLA)。ASLA與內(nèi)毒素具有較高的親合力、具有體外中和內(nèi)毒素并抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞釋放TNF-α、IL-6的作用，并對(duì)內(nèi)毒素攻擊動(dòng)物的具有顯著的保護(hù)作用。但是，ASLA的制備和進(jìn)一步分離中存在一些問題：一是ASLA產(chǎn)率不可控：無(wú)水乙醇沉淀多

2、糖過程中，目的產(chǎn)物易被溶液中析出的絮狀多糖沉淀黏附包裹，對(duì)產(chǎn)品的產(chǎn)量造成不可預(yù)計(jì)的影響，但如果剔除脫糖步驟則會(huì)使樣品在進(jìn)行硅膠柱層析時(shí)因多糖析出黏附、堵塞硅膠柱而使分離無(wú)法進(jìn)行；二是提取周期長(zhǎng)，產(chǎn)量少，不便于大量制備ASLA供完成后期單體制備及藥效學(xué)與作用機(jī)制研究需要。因此，原ASLA提取方法亟待改進(jìn)。 方法：利用聚酰胺柱層析、硅膠柱層析、離子交換-HPLC、生物傳感器、反相高效液相色譜(RP-HPLC)等技術(shù)，定向分離大蒜中具

3、有較高lipidA結(jié)合活性的組分。通過體內(nèi)外活性評(píng)價(jià)，確定其拮抗膿毒癥的主要有效成分。 結(jié)果：①利用水提取法、聚酰胺凝膠柱層析、硅膠柱層析、離子交換-HPLC等技術(shù)定向分離得到與lipidA有較高結(jié)合活性的組分：大蒜2號(hào)組分(DS2)。②DS2與LipidA具有較高的結(jié)合活性；對(duì)LPS攻擊小鼠具有顯著的保護(hù)效果。③經(jīng)HPLC分析制備后將DS2進(jìn)一步分離為4個(gè)主要組分，其中組分B在體外具有較強(qiáng)的中和LPS能力，并能顯著抑制LPS刺