實驗性動脈粥樣硬化模型兔動脈內(nèi)皮細(xì)胞p38磷酸化與MLCK的表達(dá)相關(guān)性及其褪黑素的作用.pdf

1、目的：探討動脈粥樣硬化(AS)模型兔動脈內(nèi)皮細(xì)胞p38磷酸化與肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)的表達(dá)的關(guān)系及褪黑素(MLT)是否通過p38/MAPK通路調(diào)控AS模型兔動脈內(nèi)皮細(xì)胞MLCK的表達(dá)。 方法：高膽固醇飲食誘發(fā)兔AS模型，檢測血清中血脂變化；Westernblot檢測p38磷酸化水平；Westernblot與免疫組織化學(xué)法檢測MLCK蛋白表達(dá)水平，MLT治療給藥(10mg/kg/d，d43-d84)，γ-32P-ATP摻入法

2、測定模型兔主動脈的MLCK活性；體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，分空白對照組、DMSO對照組、DMSO+oxLDL組、DMSO+oxLDL+SB203580組、DMSO+oxLDL+MLT組、DMSO+oxLDL+MLT+SB203580組。RT-PCR、Westernblot、γ-32P-ATP摻入法檢測觀察各組HUVEC p38磷酸化以及MLCK轉(zhuǎn)錄、表達(dá)和活性。 結(jié)果：動脈粥樣硬化兔模型復(fù)制成功，MLT能降低AS模

3、型兔血脂水平；Westernblot和免疫組化顯示高脂組動脈內(nèi)皮細(xì)胞p38磷酸化水平、MLCK的表達(dá)與正常對照組相比增強(qiáng)，MLT組與高脂組相比降低。γ-32P-ATP摻入法顯示高脂組動脈組織中MLCK的活性與正常對照組相比增強(qiáng)，MLT組與高脂組相比MLCK活性降低。RT-PCR顯示oxLDL組MLCK轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)，MLT組與SB203580組均抑制MLCK的轉(zhuǎn)錄，二者具有協(xié)同效應(yīng)； Westem blot結(jié)果表明oxLDL組MLCK表達(dá)、p