黃連須及其主要生物堿對(duì)非特異性免疫及鯉魚抗病力的影響.pdf

1、目的：黃連為清熱燥濕類中藥，因其具有抗菌和解熱等活性而被廣泛應(yīng)用在臨床獸醫(yī)學(xué)上，然而，關(guān)于其對(duì)巨噬細(xì)胞功能和鯉魚非特異性免疫活性的影響還未見報(bào)道。黃連須為附著在黃連根莖上的不定根，大部分被農(nóng)民當(dāng)作廢棄物丟棄在田間，本研究以黃連須及其生物堿為研究對(duì)象，對(duì)其調(diào)控非特異性免疫，增強(qiáng)鯉魚抗病力的作用機(jī)制做了初步探索，旨在促進(jìn)黃連的綜合開發(fā)利用。
　　方法和結(jié)果：
　?。?）采用HPLC法對(duì)黃連須中生物堿類成分進(jìn)行了含量測(cè)定，運(yùn)用高速

2、逆流色譜技術(shù)對(duì)黃連須中主要生物堿進(jìn)行提取分離。
　?。?）通過(guò)測(cè)定黃連須提取液及其主要生物堿對(duì)嗜水氣單胞菌和副溶血弧菌的最小抑菌濃度探究它們的抑菌活性。結(jié)果顯示，黃連須、總堿、小檗堿和黃連堿在體外對(duì)嗜水氣單胞菌和副溶血弧菌均有一定的抗菌活性，而且，黃連總生物堿的抑菌作用要優(yōu)于小檗堿、黃連堿和黃連須。
　　（3）在細(xì)胞水平初步探究黃連生物堿對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠巨噬細(xì)胞非特異性免疫功能的影響。結(jié)果顯示，4種黃連生物堿對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)

3、胞的吞噬功能都有不同程度的提高，小檗堿效果最好；小檗堿、黃連堿和巴馬汀對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活性具有正向調(diào)節(jié)作用。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黃連生物堿具有潛在的調(diào)節(jié)非特異性免疫的藥理活性。
　?。?）通過(guò)在鯉魚基礎(chǔ)飼料中添加一定比例的黃連須及其主要生物堿，探討黃連須及其主要生物堿對(duì)鯉魚血清非特異性免疫指標(biāo)（溶菌酶、髓過(guò)氧化物酶和補(bǔ)體C3）、頭腎巨噬細(xì)胞吞噬和呼吸爆發(fā)功能的影響。實(shí)驗(yàn)分為7組，NC、FRC-L（12.5g/kg黃連

4、須）、FRC-M（25g/kg黃連須）、FRC-H（50g/kg黃連須）、TA（0.78g/kg總堿）、BBR（0.78g/kg小檗堿）和Cop（0.78g/kg黃連堿）組。結(jié)果顯示，在飼喂飼料第14天，與對(duì)照組相比，血清溶菌酶和補(bǔ)體C3活性的各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比均沒有顯著性的差異，髓過(guò)氧化物酶活性、呼吸爆發(fā)和吞噬活性只有FRC-M組顯示出了顯著性地提高。在飼喂飼料第21天，與對(duì)照組相比，F(xiàn)RC-M、FRC-H、TA、BBR和Cop對(duì)血

5、清溶菌酶活性、髓過(guò)氧化物酶活性以及巨噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活性均有顯著性的提高。對(duì)于血清補(bǔ)體C3活性和巨噬細(xì)胞吞噬活性，與對(duì)照組相比，F(xiàn)RC-M組，TA組和BBR組達(dá)到了顯著性的差異。
　?。?）采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)了黃連須及其主要生物堿對(duì)鯉魚頭腎和脾臟免疫相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，F(xiàn)RC-M、FRC-H、TA和BBR能顯著上調(diào)鯉魚頭腎中IL-1β的表達(dá)；對(duì)于頭腎中TNF-α mRNA的表達(dá)，F(xiàn)RC-L、

6、FRC-M、FRC-H、TA、BBR和Cop對(duì)其有顯著性地上調(diào)作用；另外，F(xiàn)RC-M、FRC-H、TA、BBR和Cop能顯著上調(diào)鯉魚頭腎中l(wèi)ysozyme-c基因的表達(dá)；對(duì)于頭腎中C3 mRNA，F(xiàn)RC-M、TA和BBR對(duì)其表現(xiàn)了顯著性的上調(diào)作用；而且，F(xiàn)RC-L、FRC-M和FRC-H能夠顯著下調(diào)鯉魚頭腎中IL-10的表達(dá)。
　　（6）采用人工感染嗜水氣單胞菌攻毒試驗(yàn)，研究了黃連須及其主要生物堿對(duì)鯉魚感染嗜水氣單胞菌存活率的影響