FOXM1及MMP-9與膽囊癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)性初探.pdf

1、目的：檢測FOXM1(ForkheadboxM1)及MMP-9(matrixmetalloproteinases-9，MMP-9)在人膽囊癌組織中的表達情況；觀察FOXM1基因沉默對人膽囊癌細胞株NOZ生物學(xué)行為的影響，初步探討其在膽囊癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　 方法：采用免疫組化法檢測51例膽囊癌及28例慢性膽囊炎(chroniccholecystitis，CC)組織中FOXM1和MMP-9的表達情況，并統(tǒng)計分析FOXM1、

2、MMP-9的表達相關(guān)性，以及其表達與膽囊癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系；RT-PCR檢測三株膽囊癌細胞株(GBC-SD、NOZ、SGC996)中FOXM1和MMP-9的表達情況，篩選出FOXM1和MMP-9均高表達的細胞株；針對FOXM1mRNA序列設(shè)計合成siRNA的DNA模板，構(gòu)建了4條PGPU6/GFP/Neo-FOXM1重組質(zhì)粒，篩選出最強干擾效率的一條，并轉(zhuǎn)染高表達FOXM1和MMP-9的膽囊癌細胞株NOZ；RT-PCR、Western

3、blot技術(shù)檢測FOXM1沉默對細胞內(nèi)源性FOXM1表達的影響，RT-PCR和免疫細胞組化技術(shù)檢測FOXM1沉默對NOZ細胞株內(nèi)源性MMP-9表達的影響；用MTT法檢測該細胞體外增殖活性的變化；用Transwell小室法檢測該細胞體外侵襲能力的改變。
　　 結(jié)果：FOXM1、MMP-9在膽囊癌組織中的陽性率分別為52.9％和76.5％，而在慢性膽囊炎組織中的陽性率分別為10.7％和7.1％，膽囊癌組織與慢性膽囊炎組織比較兩者均有

4、顯著性差異(P≤0.001)。FOXM1在膽囊癌組織中的表達與臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P=0.007、0.008、0.019)，MMP-9在膽囊癌組織中的表達與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P=0.001、0.017)。FOXM1與MMP-9在癌組織中的表達有相關(guān)性(r=0.403，P=0.003)。RT-PCR結(jié)果顯示FOXM1、MMP-9在膽囊癌細胞株GBC-SD、NOZ、SGC996均高表達，表達無統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05

5、)，選NOZ細胞株作為試驗細胞株；PGPU6/GFP/Neo-FOXM1重組質(zhì)粒在mRNA及蛋白水平分別顯著抑制NOZ細胞FOXM1基因表達，抑制率分別最高達74.32％和82.18％，同時下調(diào)了MMP-9的表達；NOZ細胞增殖活性明顯下降；侵襲細胞數(shù)下降至(31.4±4.037)個。
　　 結(jié)論：FOXM1和MMP-9在人膽囊癌組織中呈高表達，并與膽囊癌的臨床病理參數(shù)密切相關(guān)，涉及膽囊癌的發(fā)生、發(fā)展；NOZ細胞FOXM1基因的