古尼蟲草菌絲發(fā)酵工藝優(yōu)化及其多糖對腫瘤細(xì)胞免疫抑制因子的影響.pdf

1、采用SAS軟件提供的Plackett-Burman設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析法對對古尼蟲草Cordycepsgunnii的無性型，古尼蟲擬青霉Paecilomycesgunnii5-19菌株發(fā)酵培養(yǎng)基重要因素C/N以及初始pH值、發(fā)酵時(shí)間、和轉(zhuǎn)速等諸因素對菌絲產(chǎn)量的影響進(jìn)行了優(yōu)化。最后選擇培養(yǎng)基組成為：葡萄糖(4.48％)，蛋白胨(1.67％)，KH2P04(0.5％)、K2HPO4·3H2O(0.5％)、MgSO4·7H2O(0.5％)；培養(yǎng)條

2、件溫度26℃，接種量5％(v/v)，移種時(shí)間48h，pH6.9，培養(yǎng)時(shí)間126h、轉(zhuǎn)速196rpm。優(yōu)化以后菌絲干重產(chǎn)率可以達(dá)到14.34g/L。最后經(jīng)5L發(fā)酵罐驗(yàn)證，并得到四個(gè)明顯的生長周期。通過響應(yīng)面分析法建立模型為： Y=1.370+0.038x1+0.112x2+0.212x1x2-0.178x12-0.337x22Y=1.4158-0.0423x1+0.1245x2-0.0134x3+0.212x1x2-0.0211x

3、1x3-0.1010x2x3-0.2288x12-0.2423x22-0.2878x32古尼擬青霉菌絲體經(jīng)熱水浸提、醇析、脫蛋白，得到粗多糖，再經(jīng)DEAE-52纖維素柱層析、SephadexG-100葡聚糖凝膠過濾層析得到純多糖，經(jīng)紫外光譜分析無核酸、蛋白質(zhì)、多肽等成分。 用MTT法分別檢測MPPG對LPS誘導(dǎo)鼠脾細(xì)胞體外增值的影響、體外對S180的影響，檢測MPPG培養(yǎng)的各種腫瘤上清液對LPS誘導(dǎo)的鼠脾細(xì)胞體外增殖的影響、對小