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文檔簡(jiǎn)介
1、試驗(yàn)通過(guò)在枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基中梯度添加靈芝液,馴化枯草芽孢桿菌,篩選其適宜枯草芽孢桿菌生長(zhǎng)繁殖的濃度。用馴化后的枯草芽孢桿菌發(fā)酵靈芝,將胞外多糖的含量作為考察指標(biāo),選用接菌量、攪拌轉(zhuǎn)速、初始pH、發(fā)酵溫度及發(fā)酵時(shí)間五個(gè)因素進(jìn)行單因素考察優(yōu)化發(fā)酵條件。利用掃描電鏡觀察靈芝發(fā)酵后粉末結(jié)構(gòu)的變化。利用Bruker Tensor27紅外光譜儀掃描發(fā)酵靈芝多糖和普通靈芝多糖,觀察吸收峰。選用小白鼠80只,隨機(jī)分為8組,每組10只,除空白對(duì)照組外,
2、其余各組連續(xù)3天腹腔注射80mg/kg的環(huán)磷酰胺制備免疫抑制小鼠模型,第4天開始,兩種靈芝多糖高、中、低劑量組分別給小鼠灌服200、100、50mg/(kg·d)相應(yīng)的多糖溶液,空白對(duì)照組、試驗(yàn)對(duì)照組則都灌服相應(yīng)體積的生理鹽水。每天一次,劑量為0.1mL/10g,連續(xù)灌服7d。并于第10d末次給藥24h后,處死小鼠,檢測(cè)小鼠臟器指數(shù),采用ELISA法測(cè)定IL-2、TNF-α、IL-4、IFN-γ、 IgG、IgM和IgA的含量;利用紫外
3、分光光度計(jì)檢測(cè)GSH-Px、SOD、T-AOC、CAT和MDA的含量。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:在菌體液體馴化培養(yǎng)基中添加14%的靈芝液,枯草芽孢桿菌可穩(wěn)定生長(zhǎng)繁殖,當(dāng)靈芝液濃度為16%時(shí),枯草芽孢桿菌不能穩(wěn)定生長(zhǎng)??莶菅挎邨U菌發(fā)酵靈芝產(chǎn)胞外多糖的最佳條件分別為接菌量為4%,攪拌轉(zhuǎn)速為180r/min,初始pH為6.0,發(fā)酵溫度為30℃及發(fā)酵時(shí)間為16h。通過(guò)掃描電鏡的觀察發(fā)現(xiàn)發(fā)酵靈芝粉末菌肉菌絲結(jié)構(gòu)解體、破碎成纖維狀,并以分散的菌絲片段存
4、在;而在對(duì)照樣品中,仍然存在相當(dāng)多的菌肉菌絲組織,其結(jié)構(gòu)尚未完全破壞,保持著一定的完整性。經(jīng)過(guò)紅外光譜儀掃描后發(fā)現(xiàn)兩種靈芝多糖大部分的吸收峰在相近的波數(shù)范圍內(nèi),但發(fā)酵靈芝多糖在3000~2800cm-1波數(shù)范圍內(nèi)有吸收峰,而普通靈芝多糖在此范圍內(nèi)幾乎見不到C-H鍵伸縮振動(dòng)引起的吸收峰,而且發(fā)酵后靈芝多糖的紅外光譜圖譜帶無(wú)論從位置、數(shù)量,還是形狀都有一定程度的改變。與空白對(duì)照組相比,試驗(yàn)對(duì)照組的胸腺和脾臟指數(shù)極顯著降低,血清中IL-2、T
5、NF-α、 IL-4、IFN-γ、IgG、IgM和IgA及肝組織中GSH-Px、 SOD、T-AOC、CAT的含量都極顯著下降,而MDA的含量則極顯著增加(P<0.01)。與試驗(yàn)對(duì)照組相比,發(fā)酵靈芝多糖低劑量組對(duì)免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)有顯著性提高(P<0.05),發(fā)酵靈芝多糖中、高劑量組對(duì)免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)則極顯著性提高(P<0.01)。同時(shí),發(fā)酵靈芝多糖各劑量組對(duì)免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù),血清IL-2、TNF-α、IL-4、IFN-
6、γ、IgG、IgM和IgA的含量及肝臟組織中GSH-Px、SOD、T-AOC、CAT都極顯著提高(P<0.01),而MDA的含量則極顯著降低(P<0.01)。與普通靈芝多糖相比,發(fā)酵靈芝多糖的免疫調(diào)節(jié)和抗氧化功能的效果均高于普通靈芝多糖。
結(jié)論:將馴化后的枯草芽孢桿菌發(fā)酵靈芝,通過(guò)五個(gè)單因素條件的篩選,優(yōu)化出產(chǎn)胞外多糖的最佳發(fā)酵工藝。靈芝粉末經(jīng)過(guò)發(fā)酵后菌肉菌絲結(jié)構(gòu)解體,大部分以菌絲片段形式存在,無(wú)法保持完整的形態(tài)結(jié)構(gòu)。靈芝經(jīng)過(guò)
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