蛹蟲草菌絲體多糖的分離、結(jié)構(gòu)鑒定及免疫活性研究.pdf

1、蛹蟲草（Cordyceps militaris）與冬蟲夏草同屬異種，是蟲草屬的模式種，廣泛分布于世界各地，是一種珍貴的食藥兼用的真菌。蛹蟲草具有廣泛的生理活性和獨(dú)特的藥用價值，多糖作為蛹蟲草中最重要的活性成分之一，已經(jīng)成為各界學(xué)者研究的焦點(diǎn)。目前，國內(nèi)外已經(jīng)對多糖做了大量研究，但是利用亞臨界水萃取蛹蟲草多糖的研究鮮見報道。鑒于此，本文旨在利用亞臨界水萃取技術(shù)從蛹蟲草菌絲體中分離蛹蟲草多糖，研究多糖的萃取工藝和分離純化技術(shù)，并初步研究蛹蟲

2、草多糖的結(jié)構(gòu)、溶液構(gòu)象和免疫活性，以期為新型多糖藥物的開發(fā)提供理論依據(jù)。得到的主要結(jié)論如下：
　?。?）在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計法，對亞臨界水萃取蛹蟲草多糖的工藝進(jìn)行優(yōu)化，得出最優(yōu)萃取工藝參數(shù)為：亞臨界水pH為8，萃取溫度為180℃，萃取水料比為21:1（mL/g），萃取時間為13 min。在上述參數(shù)下，多糖的理論萃取得率為7.71％，實(shí)際萃取得率為7.13%。與常規(guī)熱水萃取法相比，亞臨界水萃取法在萃取時間、萃取得

3、率方面占有較大優(yōu)勢，與常規(guī)熱水萃取法相比，萃取得率提高5.41個百分點(diǎn)。
　　（2）在濃度為0.6-1.5 mg/mL范圍內(nèi)，亞臨界水和傳統(tǒng)熱水浸提方法得到的粗多糖還原能力均隨濃度的增大而增強(qiáng)；在0.2-1.0 mg/mL范圍內(nèi)，二者均具有良好的DPPH自由基清除能力，其清除能力隨濃度的升高而增強(qiáng)，且亞臨界水萃取的多糖清除能力略高于熱水萃取的多糖，其IC50值分別為0.314和0.324 mg/mL。
　　（3）亞臨界水萃取

4、的蛹蟲草粗多糖經(jīng)DEAE-52柱層析和Sephadex G-100柱層析逐步分離純化后得到兩種均一多糖CMP-W1和CMP-S1，分別為白色絮狀固體和淡黃色絮狀固體，多糖含量分別為92.72%和89.24%。
　　（4）蛹蟲草多糖CMP-W1重均分子量Mw為366.2 kDa；由D-甘露糖、D-葡萄糖及D-半乳糖組成，其摩爾比分別為2.84:1:1.29；主鏈部分以甘露糖為主，支鏈部分以半乳糖為主；剛果紅分析得出，CMP-W1存在

5、三螺旋結(jié)構(gòu)，在中性水中的有效半徑為992 nm，分散度為0.304，原子力顯微鏡觀察得到CMP-W1是由大量的單分子鏈通過多糖分子間或分子內(nèi)作用相互纏繞在一起形成的聚集體。
　?。?）CMP-S1重均分子量Mw為460.3 kDa；由D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖組成，其摩爾比為2.05:1:1.09；甘露糖和葡萄糖是其主鏈的主要組成部分，半乳糖是其支鏈的主要組成部分。紅外光譜結(jié)果顯示CMP-S1是一種β構(gòu)型的吡喃聚糖，剛果紅

6、分析得出，CMP-S1不存在三螺旋結(jié)構(gòu)；在中性水中的有效半徑分別為713.9 nm，分散度為0.257，原子力顯微鏡觀察得到CMP-S1均由大量的單分子鏈通過多糖分子間或分子內(nèi)作用相互纏繞在一起形成的聚集體。
　　（6）體外實(shí)驗(yàn)研究表明，CMP-W1和CMP-S1均能顯著促進(jìn)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖，通過對淋巴細(xì)胞免疫因子IL-10和INF-γ的研究表明， CMP-W1和CMP-S1均可顯著促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌Thl/Th2型細(xì)胞