人根尖乳頭干細(xì)胞和牙髓干細(xì)胞生物行為的比較研究.pdf

1、目的:
　　 Gronthos S等發(fā)現(xiàn)牙髓組織中存在干細(xì)胞(dental pulp stem cells_,DPSCs)。該細(xì)胞具有強(qiáng)增殖性、多向分化的潛能,在體外誘導(dǎo)可向成牙本質(zhì)樣細(xì)胞分化。同時(shí),將DPSCs植入免疫缺陷鼠體內(nèi),發(fā)現(xiàn)有牙本質(zhì)樣基質(zhì)形成；最近Sonoyama等研究發(fā)現(xiàn)在根尖乳頭組織中存在干細(xì)胞,命名為根尖乳頭干細(xì)胞(Stem cell from the apical papilla,SCAP),并證明這類(lèi)細(xì)胞是

2、與牙髓干細(xì)胞(dental pulp stem cells,DPSCs)不同類(lèi)型的細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖求w外培養(yǎng)人根尖乳頭細(xì)胞,經(jīng)地塞米松礦化誘導(dǎo),誘導(dǎo)礦化結(jié)節(jié)的形成及DSP和其他相關(guān)蛋白的表達(dá),同時(shí)將腫瘤壞死因子α(TNF-α)對(duì)其進(jìn)行干預(yù),觀察其對(duì)礦化過(guò)程及牙本質(zhì)樣細(xì)胞形成的影響,探討炎癥條件下根尖乳頭細(xì)胞用于牙本質(zhì)再生的可行性。同時(shí)與同一牙的牙髓細(xì)胞進(jìn)行比較研究。
　　 方法:
　　 取18歲以下根尖未發(fā)育完成的健康阻

3、生第三磨牙,用Ⅰ型膠原酶和Dispase消化法進(jìn)行根尖乳頭細(xì)胞和牙髓細(xì)胞的培養(yǎng),細(xì)胞達(dá)到匯合后進(jìn)行傳代,取第3～5代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。
　　 1.取第3代細(xì)胞,將根尖乳頭細(xì)胞、牙髓細(xì)胞以1×104個(gè)/mL的細(xì)胞懸液,分別接種于預(yù)先放置有細(xì)胞爬片的6孔板中,用免疫熒光方法鑒定細(xì)胞的間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物STRO-1的表達(dá)。
　　 2.將根尖乳頭細(xì)胞、牙髓細(xì)胞分別以1×104個(gè)/mL接種于96孔板中,孵育4d后,采用MTT法檢測(cè)

4、細(xì)胞的增值狀況。
　　 3.將根尖乳頭細(xì)胞、牙髓細(xì)胞分別以1×103個(gè)/mL接種于24孔板中,細(xì)胞大部分伸展貼壁后,加入礦化誘導(dǎo)液,孵育28d后,茜素紅S染色法檢測(cè)礦化結(jié)節(jié)形成情況,免疫組化法檢測(cè)牙本質(zhì)特異性蛋白DSP、礦化相關(guān)蛋白BSP表達(dá)情況。
　　 4.將根尖乳頭細(xì)胞、牙髓細(xì)胞分別以1×104個(gè)/mL接種于96孔板中,24h后將含有不同濃度TNF-α(5、10、50 ng/mL)的培養(yǎng)液加入,孵育4d后,MTT法檢

5、測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響。
　　 5.將根尖乳頭細(xì)胞、牙髓細(xì)胞分別以1×103個(gè)/mL接種于24孔板中,細(xì)胞大部分伸展貼壁后,加入含有TNF-α的礦化誘導(dǎo)液,孵育28d后,茜素紅S染色法檢測(cè)礦化結(jié)節(jié)形成情況,免疫組化法檢測(cè)牙本質(zhì)特異性蛋白DSP、礦化相關(guān)蛋白BSP表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.原代培養(yǎng)的根尖乳頭細(xì)胞呈梭形、多角形或紡錘形,形似成纖維細(xì)胞。牙髓細(xì)胞也似成纖維細(xì)胞,形狀與根尖乳頭細(xì)胞相似。免疫熒

6、光技術(shù)表明,部分細(xì)胞STRO-1染色陽(yáng)性。
　　 2.MTT法結(jié)果表明,APCS較之DPCS具有更強(qiáng)的增值活性(P<0.05)。
　　 3.礦化液體外誘導(dǎo),根尖乳頭細(xì)胞和牙髓細(xì)胞疊層生長(zhǎng),形成肉眼可見(jiàn)的結(jié)節(jié)；茜素紅S染色,有橘紅色礦化結(jié)節(jié)形成:免疫組織化學(xué)染色技術(shù)顯示,細(xì)胞誘導(dǎo)28d后,牙本質(zhì)特異性蛋白DSP、礦化相關(guān)蛋白BSP陽(yáng)性表達(dá)。
　　 4.在10ng/mL和50ng/mL兩個(gè)濃度時(shí),TNF-α對(duì)根尖乳頭

7、細(xì)胞、牙髓細(xì)胞兩種細(xì)胞的增值均具有促進(jìn)作用(P<0.05)。
　　 5.用含有TNF-α的礦化液誘導(dǎo),根尖乳頭細(xì)胞和牙髓細(xì)胞在較早的時(shí)間便有肉眼可見(jiàn)的結(jié)節(jié)形成。茜素紅S染色顯示,有橘紅色礦化結(jié)節(jié)形成；免疫組織化學(xué)染色技術(shù)顯示,細(xì)胞在炎性因子的誘導(dǎo)28d后,DSP、BSP陽(yáng)性表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　　 體外培養(yǎng)的根尖乳頭細(xì)胞形似成纖維細(xì)胞,STRO-1表達(dá)陽(yáng)性；人根尖乳頭較牙髓細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖活性,在炎性環(huán)境下也