提高牙髓干細(xì)胞牙向分化潛能的研究.pdf

1、福建師范大學(xué)碩士學(xué)位論文提高牙髓干細(xì)胞牙向分化潛能的研究姓名：王放放申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：發(fā)育生物學(xué)指導(dǎo)教師：張彥定20090601中文文摘中文文摘隨著人們生活質(zhì)量的提高，人們對牙齒的關(guān)注也越來越多。人們不僅想買最好的牙膏使自己的牙齒保持潔白，還想它能夠永遠(yuǎn)健康，沒有齲齒，沒有壞牙。然而牙齒的缺失或者損傷又不可避免的常常敲響健康者的大門，盡管這并不是致命的，但卻讓人寢食難安。因此研究牙齒再生的重大課題就毫無疑問地成了科學(xué)家不可推卸的責(zé)

2、任。研究已證明，牙齒發(fā)育是依賴牙上皮一牙間充質(zhì)之間相互誘導(dǎo)而進(jìn)行的。另外，牙齒的組織形態(tài)學(xué)和分子機(jī)制是所有器官中研究最為透徹的。而且牙齒是人體中唯一能在成體中再次發(fā)育而且結(jié)構(gòu)相對簡單的一個(gè)器官。因此，從器官發(fā)育的角度出發(fā)，牙齒的再生要比其他器官的再生更為容易，更有可能實(shí)現(xiàn)。隨著千細(xì)胞技術(shù)的不斷推廣，目前已經(jīng)有多個(gè)研究小組采用胚胎干細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞、作為間充質(zhì)源性細(xì)胞進(jìn)行再生牙齒的研究；利用成體牙髓干細(xì)胞進(jìn)行研究的也有幾例但都沒取得突破

3、性的進(jìn)展。06，07兩年間，IPS細(xì)胞的誕生給了我們新的研究視角。采用慢病毒技術(shù)在體外對牙髓干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)用以研究牙髓干細(xì)胞牙向分化潛能及找出一種促進(jìn)牙髓干細(xì)胞牙向分化的關(guān)鍵因子便成了本課題的主要內(nèi)容。首先，本研究選擇三種在牙齒發(fā)育過程中的重要基因作為候選因子BMP4、MSXl、PAX9，將它們分別克隆到慢病毒載體PNLIRES2EGFP上，形成了三種新的慢病毒載體燦hBmp4IRES2EGFP、pNLhMsxIIRES2EGFP和pN

4、LhPax9Ⅱ己ES2一EGFP。第二，將這三種慢病毒載體連同另外兩種質(zhì)粒VSVG和pHelpel“分別轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞大量生產(chǎn)濃縮出高滴度的病毒。將生產(chǎn)的慢病毒分別以MOI(感染復(fù)數(shù))=10，20，30，40，50，60來感染牙髓干細(xì)胞，以確定感染牙髓干細(xì)胞的最佳MOI。結(jié)果表明，當(dāng)MOI=50時(shí)感染效率最高，可以達(dá)到728％。因此以MOI=50的感染量來進(jìn)行以下的誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)。第三，將三種病毒分為以下六組分別感染牙髓干細(xì)胞：1，用單一一