結(jié)直腸癌中microRNA-150的表達與p21、p27的關(guān)系及其對細胞增殖的影響.pdf

1、目的:結(jié)直腸癌是嚴重威脅人類生命健康的惡性腫瘤之一，統(tǒng)計分析報告顯示其在常見癌癥中位居第三，發(fā)病率及病死率呈日益增高的趨勢。結(jié)直腸癌是多種因素、多個基因相互作用逐步發(fā)展的結(jié)果，但其具體的發(fā)生發(fā)展機制尚不完全明確。微小RNA(microRNA，miRNA)是一類長約22個核苷酸的小分子非編碼RNA，其通過轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)mRNA的翻譯或降解，從而調(diào)節(jié)多種基因的表達，并參與調(diào)控細胞的增殖、凋亡及分化。有研究顯示miR-150異常表達和功能失調(diào)

2、在腫瘤發(fā)生、感染及自身免疫性疾病等多種病理生理狀態(tài)下可發(fā)揮重要作用，本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)miR-150在結(jié)直腸癌組織中低表達。抑癌基因p21、p27被認為是細胞周期調(diào)控的重要負性調(diào)控因子，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。通過實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-Time qRT-PCR)的方法檢測結(jié)直腸癌患者組織中miR-150、p21和p27的表達，并對三者的相關(guān)性進行分析，同時用CCK-8法研究上調(diào)miR-150對結(jié)直腸癌細胞增殖活性的影響，

3、為深入了解結(jié)直腸癌發(fā)病機制提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.收集35例2012年9月～2013年9月來自河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院和河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院結(jié)直腸癌手術(shù)標本。每例標本分別取自結(jié)直腸原發(fā)腫瘤組織及上（下）切緣正常黏膜且術(shù)后病理證實無癌組織侵犯的癌旁組織。新鮮標本離體后迅速置于液氮中，于-80℃保存。35名患者術(shù)前未接受任何化療和放療。
　　2.選取結(jié)直腸癌細胞株HCT116進行細胞培養(yǎng)。
　　3.應(yīng)用RT-

4、PCR方法檢測35例結(jié)直腸癌組織及對應(yīng)結(jié)直腸正常黏膜組織中miR-150、p21和p27的表達水平，分析三者表達相關(guān)性，并分析miR-150、p21和p27的表達與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。
　　4.對HCT116細胞進行miR-150轉(zhuǎn)染，將轉(zhuǎn)染miR-150模擬物組作為實驗組，將轉(zhuǎn)染無義寡核苷酸組作為對照組。
　　5.HCT116細胞進行細胞轉(zhuǎn)染后1、2、3、4、5d，分別應(yīng)用CCK-8法檢測5個時段的OD值，繪制

5、細胞生長曲線，觀察對照組和實驗組間細胞增殖改變情況。
　　6.采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，對實驗結(jié)果進行分析，計量資料以中位數(shù)（四分位數(shù)）表示，兩組間配對樣本采用非參數(shù)檢驗、Spearman相關(guān)分析，以P＜0.05表示差異存在有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1.miR-150在35例結(jié)直腸癌組織中表達量0.071(0.031，0.129)，正常黏膜組織中表達量0.336(0.168，0.817)，可見miR-150在

6、癌組織中的表達明顯低于正常黏膜組織中的表達(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學意義。
　　2.p21在35例結(jié)直腸癌組織中表達量0.007(0.003，0.083)，正常黏膜組織中表達量0.036(0.012，0.164)，可見p21在癌組織中的表達明顯低于正常黏膜組織中的表達(P=0.013)，差異有統(tǒng)計學意義。
　　3.p27在35例結(jié)直腸癌組織中表達量0.016(0.001，0.048)，正常黏膜組織中表達量0.023(0.

7、002，0.063)，可見p27在癌組織中的表達低于正常黏膜組織中的表達(P=0.340)，但差異無統(tǒng)計學意義。
　　4.在結(jié)直腸癌組織中miR-150與p21存在相關(guān)性(rs=0.434，p=0.009);miR-150與p27不存在相關(guān)性（rs=0.033，P=0.855）。
　　5.miR-150、p21和p27的表達與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征均無關(guān)(P＞0.05)。
　　6.HCT116細胞轉(zhuǎn)染miR-150后

8、1、2、3、4、5d，通過CCK-8法檢測各組細胞增殖情況，結(jié)果顯示:miR-150可以明顯抑制結(jié)直腸癌細胞的增殖，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.0001)。
　　結(jié)論:
　　1.miR-150在結(jié)直腸癌中低表達，提示其可能對結(jié)直腸癌具有抑癌作用。
　　2.p21在結(jié)直腸癌中低表達，提示其可能對結(jié)直腸癌具有抑癌作用。
　　3.miR-150可能通過抑制結(jié)直腸癌細胞的增殖，發(fā)揮抑癌作用。
　　4.miR-150