橙皮素和柚皮素對血管內皮細胞NO分泌功能影響的研究.pdf

1、血管內皮細胞產生的一氧化氮(nitric oxide，NO)在調節(jié)血管舒縮、維持凝血一溶栓平衡方面扮演著重要的角色．內皮細胞NO分泌不足或失活是血管內皮功能紊亂的主要特征之一，也是導致心血管疾病發(fā)生發(fā)展的重要病理事件。中藥枳實具有促進血液循環(huán)的作用，但相關的藥理活性物質并不明確。橙皮素(hesperetin)和柚皮素(naringenin)及其糖苷是枳實中含量最高的黃酮類成分(10％左右)。曾有報道稱其具有雌激素樣活性，而雌激素具有促進

2、內皮細胞分泌NO的作用，因此，我們推測枳實促進血液循環(huán)的作用與橙皮素和柚皮素有關。為了證實上述假說，本文開展了以下研究工作： 觀察了橙皮素和柚皮素對人乳腺癌McF-7細胞的促增殖作用。在去除培養(yǎng)液中內源性雌激素的情況下，橙皮素和柚皮素明顯促進MCF-7細胞的增殖，在50uM的濃度下顯示與雌二醇(E2，10nm)相近的作用效果。雌激素受體拮抗劑ICll82，780和4-羥基-他莫昔芬(TAM)能夠分別完全和部分抑制橙皮素和柚皮素的

3、促增殖作用。同時，橙皮素和柚皮素能部分拮抗E2的促增殖作用，說明橙皮素和柚皮素具有雌激素樣活性。但是，當內源性雌激素水平較高時，橙皮素和柚皮素可能通過競爭性抑制作用部分拮抗E2的活性，因而表現出一定的抗雌激素樣作用效果。采用報告基因模型對這兩個化合物的進一步研究發(fā)現，橙皮素和柚皮素均能誘導ERn控制的報告基因的表達，但僅有柚皮素，而不是橙皮素能激活ERB，這一現象說明這兩種化合物對ER亞型的激活具有選擇性。 觀察了橙皮素和柚皮素

4、對人臍靜脈內皮細胞’NO分泌功能的影響。采用DAN熒光法測定培養(yǎng)液中亞硝酸鹽的含量，間接反映內皮細胞分泌NO的水平。研究發(fā)現，在消除培養(yǎng)液中內源性雌激素的情況下，橙皮素在12.5uM-100uM濃度范圍內顯著促進血管內皮細胞分泌NO。且呈量效關系，但柚皮素在此濃度范圍內幾乎無此活性。ICll82,780和TAM能夠分別完全和輕微抑制橙皮素的作用，同時，在含常規(guī)血清的培養(yǎng)條件下，橙皮素和柚皮素能降低內皮細胞分泌NO的水平，說明橙皮素的促N

5、O分泌作用與雌激素受體激活作用有關。在不同的內源性雌激素水平條件下，橙皮素或促進內皮細胞NO分泌或減少內皮細胞分泌NO，揭示此化合物在調節(jié)內皮細胞NO分泌功能方面具有雙向調節(jié)作用。 采用鈣離子熒光指示劑觀察橙皮素和柚皮素對人臍靜脈內皮細胞內鈣離子水平的影響，并運用Westem blot技術測定了這兩個化合物對內皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表達的影響。實驗結果表明，橙皮素和柚皮素均能夠快速升高人臍靜脈內皮細胞內鈣離子濃度，但只

6、有橙皮素能夠增加eN0s的蛋白表達水平。此外，基因轉錄抑制劑放線菌素D能抑制橙皮素的促內皮細胞NO分泌作用，這說明橙皮素促進內皮細胞分泌NO涉及eN0s的轉錄和表達調節(jié)。柚皮素雖然能激活雌激素受體，但不能誘導eNOS表達的增加，其原因還有待進一步研究。 綜上所述，橙皮素和柚皮素均屬于雌激素樣活性物質，但在內源性雌激素水平較高時，顯示抗雌激素樣作用。其中，只有橙皮素能在雌激素水平不足的情況下促進內皮細胞分泌NO，此效應涉及eNOS