存活素基因過表達對血管內(nèi)皮細胞遷移和增殖能力的影響.pdf

1、目的：外周動脈疾?。≒eriphery artery disease,PAD）是血管外科常見病種，在該病初期因外周動脈狹窄程度不重或及時形成側(cè)枝循環(huán)代償可無明顯臨床表現(xiàn)，或僅表現(xiàn)為下肢疲乏無力等較輕癥狀，但如果在疾病初期不加干預(yù)，隨著病程的快速進展，外周動脈可進一步狹窄，進而出現(xiàn)疼痛、間歇性跛行等下肢缺血癥狀，此時積極治療只能減緩疾病的進一步發(fā)展，但不能從根本上治愈疾病。目前國內(nèi)外PAD的治療措施主要為藥物治療、動脈旁路移植及介入治療等

2、，病程及治療過程中因各種因素影響均可不同程度損傷動脈內(nèi)膜，而動脈內(nèi)膜一旦損傷后因血管內(nèi)皮細胞增殖能力極差，不能及時修復導致?lián)p傷處更易血栓形成，導致血管管腔的進一步狹窄。目前國內(nèi)外把如何能高效修復內(nèi)皮細胞損傷、靶向增大狹窄血管管腔，緩解患者臨床癥狀作為基礎(chǔ)研究熱點。本實驗通過前期大量基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)存活素（Survivin,SVV）基因在轉(zhuǎn)入相關(guān)細胞中后可表現(xiàn)出抑制細胞凋亡、促進細胞增殖等多個方面的能力，因此研究轉(zhuǎn)染 SVV基因到血管內(nèi)皮細胞

3、增殖（Vascular endothelial cells,VECs）中后其增殖和遷移能力的變化，可得到符合需求的VECs。
　　方法:普食飼養(yǎng)SD大鼠（4-6周齡，雌雄各半），截取若干段大鼠腹主動脈,行原代細胞培養(yǎng)1周左右得到穩(wěn)定生長的大鼠動脈內(nèi)皮細胞株（Rat artery endothelial cell,RAEC）。通過觀察細胞形態(tài)及CD31細胞免疫熒光檢測明確細胞類型，將細胞分成3組，分別為空白對照組（bc）、陰性對照組

4、（nc）及實驗組（svv）。bc組無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基，nc組采用空病毒載體轉(zhuǎn)染，svv組采用攜帶SVV基因的腺病毒轉(zhuǎn)染，3組細胞經(jīng)過對應(yīng)處理后繼續(xù)培養(yǎng)以獲得足夠后續(xù)實驗所需的細胞蛋白質(zhì)。Western-blotting法檢測3組細胞中SVV蛋白水平，CCK8法檢測VECs的增殖能力，Transwell實驗檢測VECs遷移的能力，Western-blotting法檢測極光激酶B（AuroraB）、磷酸化AuroraB和著絲粒內(nèi)蛋白（INCE