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文檔簡介
1、研究背景:血管內(nèi)皮功能障礙與高血壓病的發(fā)生密切相關(guān),血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)是造成血管內(nèi)皮細胞損傷的一個重要因素,自噬是一種細胞應對損傷的保護性反應,而迄今對高血壓病理過程中血管內(nèi)皮細胞中自噬的作用仍知之甚少。在AngⅡ引發(fā)損傷的血管內(nèi)皮細胞中,我們推測自噬可能是防止血管內(nèi)皮細胞損傷的一種潛在機制。因此,本研究通過觀察AngⅡ?qū)ρ軆?nèi)皮細胞自噬的影響,并初步探討AngⅡ誘導血管內(nèi)皮細胞自噬的可能機制,為高血壓病的有效防治提供新思路。
2、r> 研究目的:研究血管緊張素Ⅱ?qū)ρ軆?nèi)皮細胞自噬的影響,并初步探討血管緊張素Ⅱ誘導血管內(nèi)皮細胞發(fā)生自噬的可能機制。
研究方法:以EA.hy926血管內(nèi)皮細胞作為實驗研究對象,CCK8法檢測10-8、10-7、10-6mol/L的AngⅡ作用24h后對EA細胞生長的影響,利用熒光酶標儀檢測AngⅡ(10-7mol/L)、AngⅡ聯(lián)合N-乙酰半胱氨酸(NAC,50μmol/L)作用24h后細胞中ROS生成量;然后固定濃度為10
3、-7mol/L的AngⅡ處理不同時間(0h、6h、12h、24h、36h)后或不同濃度(10-8、10-7、10-6mol/L)的AngⅡ處理24h,通過Westernblotting分析LC3-Ⅱ蛋白變化以及吖啶橙(AO)染色后通過熒光顯微鏡下觀察胞漿中自噬體形成的情況來判斷血管內(nèi)皮細胞自噬的發(fā)生情況;AngⅡ(10-7mol/L)聯(lián)合自噬的抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA,2mmol/L)、N-乙酰半胱氨酸(NAC,50μmol/L)
4、或纈沙坦(Valsartan,20μmol/L)處理24h后使用相同方法檢測血管內(nèi)皮細胞自噬的發(fā)生情況。
研究結(jié)果:EA.hy926血管內(nèi)皮細胞經(jīng)過AngⅡ刺激后胞內(nèi)ROS生成量顯著增加(P<0.05),LC3-Ⅱ蛋白的表達明顯增強(P<0.05),自噬體的形成明顯增加;3-MA、NAC或Valsartan可以明顯抑制血管內(nèi)皮細胞中AngⅡ所誘導的LC3-Ⅱ蛋白表達(P<0.05)及自噬體的形成。
研究結(jié)論:AngⅡ
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