核仁素適配體修飾的雷公藤甲素體外抗胰腺癌作用研究及機(jī)制初探.pdf

1、目的:
　　研究雷公藤甲素-核仁素適配體偶合物（簡(jiǎn)稱偶合物）體外抗胰腺癌作用，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探索。
　　方法:
　　(1)采用CCK-8法檢測(cè)不同濃度、時(shí)間點(diǎn)(24，48h)核仁素適配體細(xì)胞毒性，以及對(duì)比偶合物、雷公藤甲素，對(duì)MIA PaCa-2細(xì)胞增殖的抑制作用。
　　(2)以吉西他濱耐藥的胰腺癌胞系——MIA PaCa-2，作為細(xì)胞模型，采用CCK-8法對(duì)比不同濃度、不同時(shí)間點(diǎn)(24，48，72h)偶合物

2、和吉西他濱對(duì)MIA PaCa-2細(xì)胞增殖的抑制作用，計(jì)算藥物IC50。
　　(3)采用Annexin V/PI雙染法、ELISA試劑盒檢測(cè)Caspase-3活性，檢測(cè)偶合物對(duì)MIA PaCa-2細(xì)胞系凋亡誘導(dǎo)作用。
　　(4)通過(guò)蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)同時(shí)間點(diǎn)(12h，24h)，不同濃度偶合物對(duì)HSP70在MIA PaCa-2中表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:
　　(1)偶合物、雷公藤甲素以及核仁素適配體均可有效抑制MIA

3、 PaCa-2增殖，抑制作用具有時(shí)間和劑量依賴性。200nM核仁素適配體處理MIA PaCa-2細(xì)胞48h后，其抑制率達(dá)到38.19％。對(duì)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，相同濃度下偶合物對(duì)MIA PaCa-2的抑制率均低于雷公藤甲素對(duì)MIA PaCa-2的抑制率，當(dāng)藥物作用濃度達(dá)到25nM，存在顯著性差異，P＜0.05。
　　(2)在各時(shí)間點(diǎn)，不同濃度偶合物和吉西他濱對(duì)MIA PaCa-2均有增殖抑制作用，且具有時(shí)間和劑量依賴性。偶合物和吉西他濱I

4、C50分別為97.86±12.52nM，142.5±31.26nM，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05。
　　(3) Annexin V/PI雙染法檢測(cè)結(jié)果表明，50-200nM偶合物與MIA PaCa-2共孵育24、48h后，細(xì)胞早期凋亡率為10.4％至1％; Caspase-3活性檢測(cè)結(jié)果表明，50-200nM偶合物與MIA PaCa-2共孵育12、24h后，Caspase-3活性出現(xiàn)不同程度升高，最高可達(dá)約9.24倍。
　　

5、(4)免疫印跡結(jié)果表明，50-200nM偶合物與MIA PaCa-2共孵育12、24h后，細(xì)胞中HSP70表達(dá)量被顯著降低。
　　結(jié)論:
　　核仁素適配體對(duì)雷公藤甲素的結(jié)構(gòu)修飾，降低了偶合物的細(xì)胞毒性。偶合物對(duì)吉西他濱耐藥的胰腺癌胞系——MIA PaCa-2有顯著地抑制作用，其效果優(yōu)于吉西他濱。偶合物對(duì)MIA PaCa-2可通過(guò)Caspase依賴途徑誘導(dǎo)凋亡，其促凋亡機(jī)制可能是通過(guò)降低HSP70的表達(dá)實(shí)現(xiàn)。相較于吉西他濱，偶