牛外周血中性粒細(xì)胞孕酮受體表達(dá)及其作用研究.pdf

1、孕酮（Progesterone，P）是誘發(fā)牛圍產(chǎn)期免疫抑制的關(guān)鍵激素之一，其濃度的動態(tài)變化在外周血中性粒細(xì)胞（polymorphonuclear neutrophil，PMN）的分布、數(shù)量、狀態(tài)以及功能改變過程中發(fā)揮重要作用，但P誘導(dǎo)牛外周PMN的信號機(jī)制，特別是受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制仍有待闡釋。本試驗(yàn)以閹牛外周血PMN為研究對象，分別采用qPCR、western blot方法，探討不同濃度P在體內(nèi)注射和體外誘導(dǎo)條件下，P核受體、膜受體

2、和雌激素核受體、膜受體以及免疫活性分子TLR2、TLR4、及NF-κB等在基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平上的變化，從而為確定牛PMN的P受體表達(dá)狀況、揭示牛外周血P調(diào)節(jié)PMN免疫功能的基因組信號途徑和非基因組信號途徑的特征、闡釋牛外周血P濃度與PMN免疫活性的內(nèi)在聯(lián)系提供新證據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果顯示：
　　1、受體表達(dá)：
　?。?）nPRs表達(dá)：牛PMN在基因轉(zhuǎn)錄和蛋白水平上表達(dá)nPRs；低濃度P刺激PRB表達(dá)，加入核受體抑制劑RU486和

3、LPS后均表現(xiàn)出下調(diào)趨勢；高濃度P上調(diào)PRB的表達(dá)，且RU486對PRB的表達(dá)無顯著性影響，在LPS引起的炎癥反應(yīng)中PRB表達(dá)下調(diào)。
　?。?）mPRs（mPRα、mPRβ、PGRMC1）表達(dá)：牛PMN在基因轉(zhuǎn)錄和蛋白水平上表達(dá)mPRs；低濃度P下調(diào)mPRα和PGRMC1的表達(dá)，上調(diào)mPRβ表達(dá)在2h處達(dá)到峰值。在RU486和LPS作用下以上三種膜受體表達(dá)趨勢無明顯變化；高濃度P上調(diào)mPRβ和PGRMC1，抑制mPRα表達(dá)且在RU

4、486和LPS作用下抑制作用逐漸解除。
　?。?）ERs表達(dá)：低濃度P上調(diào)ERα和GPR30，在加入RU486后均表現(xiàn)出顯著的下調(diào)趨勢。
　　2、細(xì)胞活性信號通路的信號表達(dá)：
　?。?）MyD88：高低濃度P均上調(diào)MyD88，且在30min后達(dá)到峰值水平，低濃度P在RU486作用下抑制MyD88表達(dá)，高濃度P時(shí)無影響。
　?。?）TLR2、TLR4：高低濃度P均下調(diào)TLR2，上調(diào)TLR4表達(dá)，且低濃度時(shí)RU486

5、和LPS對二者的表達(dá)影響顯著，均表現(xiàn)出抑制作用。
　?。?）NF-κB：高濃度P抑制NF-κB表達(dá)，在RU486和LPS作用下抑制作用解除；低濃度P在30min后解除對NF-κB表達(dá)的抑制作用，RU486和LPS對其表達(dá)均無顯著影響。
　　本試驗(yàn)證實(shí)了牛外周PMN在基因和蛋白水平上存在nPRs、mPRs以及E受體的表達(dá)，并起到交叉介導(dǎo)P的非基因組效應(yīng)。孕酮是通過PR介導(dǎo)的基因組途徑以及上調(diào)或下調(diào)其膜受體引發(fā)快速的非基因組信號