牛外周血中性粒細胞孕酮受體表達及其作用研究.pdf

1、孕酮（Progesterone，P）是誘發(fā)牛圍產(chǎn)期免疫抑制的關鍵激素之一，其濃度的動態(tài)變化在外周血中性粒細胞（polymorphonuclear neutrophil，PMN）的分布、數(shù)量、狀態(tài)以及功能改變過程中發(fā)揮重要作用，但P誘導牛外周PMN的信號機制，特別是受體介導的信號轉導機制仍有待闡釋。本試驗以閹牛外周血PMN為研究對象，分別采用qPCR、western blot方法，探討不同濃度P在體內注射和體外誘導條件下，P核受體、膜受體

2、和雌激素核受體、膜受體以及免疫活性分子TLR2、TLR4、及NF-κB等在基因轉錄和蛋白表達水平上的變化，從而為確定牛PMN的P受體表達狀況、揭示牛外周血P調節(jié)PMN免疫功能的基因組信號途徑和非基因組信號途徑的特征、闡釋牛外周血P濃度與PMN免疫活性的內在聯(lián)系提供新證據(jù)。試驗結果顯示：
　　1、受體表達：
　?。?）nPRs表達：牛PMN在基因轉錄和蛋白水平上表達nPRs；低濃度P刺激PRB表達，加入核受體抑制劑RU486和

3、LPS后均表現(xiàn)出下調趨勢；高濃度P上調PRB的表達，且RU486對PRB的表達無顯著性影響，在LPS引起的炎癥反應中PRB表達下調。
　　（2）mPRs（mPRα、mPRβ、PGRMC1）表達：牛PMN在基因轉錄和蛋白水平上表達mPRs；低濃度P下調mPRα和PGRMC1的表達，上調mPRβ表達在2h處達到峰值。在RU486和LPS作用下以上三種膜受體表達趨勢無明顯變化；高濃度P上調mPRβ和PGRMC1，抑制mPRα表達且在RU

4、486和LPS作用下抑制作用逐漸解除。
　?。?）ERs表達：低濃度P上調ERα和GPR30，在加入RU486后均表現(xiàn)出顯著的下調趨勢。
　　2、細胞活性信號通路的信號表達：
　?。?）MyD88：高低濃度P均上調MyD88，且在30min后達到峰值水平，低濃度P在RU486作用下抑制MyD88表達，高濃度P時無影響。
　?。?）TLR2、TLR4：高低濃度P均下調TLR2，上調TLR4表達，且低濃度時RU486

5、和LPS對二者的表達影響顯著，均表現(xiàn)出抑制作用。
　?。?）NF-κB：高濃度P抑制NF-κB表達，在RU486和LPS作用下抑制作用解除；低濃度P在30min后解除對NF-κB表達的抑制作用，RU486和LPS對其表達均無顯著影響。
　　本試驗證實了牛外周PMN在基因和蛋白水平上存在nPRs、mPRs以及E受體的表達，并起到交叉介導P的非基因組效應。孕酮是通過PR介導的基因組途徑以及上調或下調其膜受體引發(fā)快速的非基因組信號